il-1a基因插入缺失多态与斑秃易感性的关联研究及功能分析

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1、硕士学位论文论文题目IL-1A基因插入/缺失多态与斑秃易感性的关联研究及功能分析路丹丹研究生姓名施辛指导教师姓名皮肤病与性病学专业名称免疫性皮肤病研究方向2013年3月论文提交日期I中文摘要IL-1A基因插入/缺失多态与斑秃易感性的关联研究及功能分析中文摘要目的：探究白介素-1α（Interleukin-1α，IL1A）基因插入/缺失多态（rs3783553）与中国人群斑秃易感性的关联性，进而探讨其中的具体分子机制。方法：（1）采用对华东及华南地区两个独立的病例对照研究（其中华东地区病例数为208例，对照组数为416例；华南地区病例数为105例，对照组数为210例），PCR扩增

2、结合聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对候选多态进行基因分型，Logistic统计分析IL1A基因多态与斑秃的关联性。（2）通过构建的荧光素酶表达载体，与miRNA共转染人皮肤细胞系（A-375和CCD-1095Sk），采用双荧光素酶报告系统进行检测。结果：（1）在病例组及对照组，rs3783553位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡。用Logistic回归分析校正性别、年龄，对两个地区的人群整体分析后发现，与Del/Del相比，携带有Ins/Del和Ins/Ins基因型的个体斑秃易感性明显降低（OR-5值分别为0.55和0.47；95%CI分别为0.41-0.75，0

3、.28-0.76；P值分别为6.24×10和0.001）。我们对发病年龄进行了分层分析，结果显示，分层后Ins/Del和Ins/Ins基因型等位基因的保护作用仍能体现，早期发病组（<30岁）携带有Ins/Del和Ins/Ins基因型的频率（41.3%）明显低于晚期发病组（60.4%）（OR=0.48，95%C.I.=0.29-0.77,P=0.001）。（2）将Pre-mir-122与重组载体共转染A-375和CCD-1095Sk两种人皮肤细胞系。实验结果显示，在加入的Pre-mir-122浓度逐渐增加时，与含有“TTCA”插入型等位基因的载体比较，含有“TTCA”缺失型等位基

4、因载体的荧光强度则显著下降，并呈现浓度依赖趋势。结论：（1）中国人群中rs3783553插入缺失多态与斑秃易感性存在显著关联，这种阳性关联在早期发病组更为明显。II（2）功能学实验显示，rs3783553插入缺失多态可能通过影响miR-122与IL1A-3′UTR的紧密结合，从而调节IL1α的表达，进而参与斑秃的发生。我们的实验结果提示IL1A有望成为研究斑秃发生机制、早期诊断以及生物治疗的新靶点。关键词：斑秃；IL1A；rs3783553；遗传易感性作者：路丹丹指导教师：施辛教授III英文摘要IL-1A基因插入/缺失多态与斑秃易感性的关联研究及功能分析AbstractObje

5、ctive:ToinvestigatewhetherthepolymorphismsinInterleukin-1αwereassociatedwithalopeciaareata(AA)susceptibilityinChinesepopulationsandtheunderlinedmolecularmechanism.Methods:(1)Weperformedcase-controlassociationstudies(EasternChinapanelcontained208AApatientsand416healthycontrols;SouthernChinese

6、panelcontained105AApatientsand210healthycontrols)usingPCR-PAGEmethod.LogisticregressionmodelwasusedforevaluatingtheassociationbetweenpolymorphismsandAAsusceptibility.(2)AlternativeRenillaluciferasereportergeneswerecotransfectedwithmiRNAsintoA-375andCCD-1095Skcellsofskin,andRenillaluciferasea

7、ctivitiesweremeasuredwiththeDualLuciferaseassaysystem.Results:(1)Inbothcasesandhealthycontrols,theobservedgenotypicfrequenciesforrs3783553wereinagreementwiththeHardy-Weinbergequilibrium.Logisticregressionanalysisshowedthattheheterozygoteandthehomoz