十全大补汤总多糖成分抑瘤和免疫调节作用的研究

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：112100706010医学硕士学位论文十全大补汤总多糖成分抑瘤和免疫调节作用的研究学位申请人：杜春海指导教师：曹志然教授学位类别：医学硕士学科专业：药理学授予单位：河北大学答辩日期：二〇一五年六月U.D.C.:CODE:10075ClassifiedIndex:NO:112100706010ADissertationfortheDegreeofM.MedicineStudiesontheEffectofAnti-tumorandImmunomodulatoryofto

2、talPolysacharidefromShiquandabutangCandidate:Chun-haiDuSupervisor:Prof.Zhi-ranCaoAcademicDegreeAppliedfor:MasterofmedicineSpecialty:PharmacologyUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:June,2015摘要摘要目的：为了研究十全大补汤总多糖成分的体内外抗肿瘤作用及作用机制，为十全大补汤的临床应用提供实验依据。方法

3、：1.体外实验：提取十全大补汤总多糖，制备大鼠含药血清。51.1将1×10/mlH22细胞接种在96孔细胞培养板中，每孔100μL，分别加入10%、20%和40%浓度的含药血清，并以正常大鼠血清作为对照，检测培养后24h、48h、72h的细胞生长抑制率；61.2无菌操作取小鼠脾脏细胞，调整细胞浓度2×10个/ml，加入96孔培养板，每孔90μL，加入不同浓度的多糖含药血清，分别为：10%、20%和40%浓度，检测含药血清对脾细胞增殖的影响；另取24孔细胞培养板，加入上述脾细胞悬液，每孔1mL，分别加入不同浓度

4、的多糖含药血清，培养24h后离心取上清，用ELISA法，按试剂盒说明检测IL-2，通过标准曲线计算IL-2含量。2.体内试验6分别取0.2ml5×10个/ml的H22细胞，接种于小鼠右侧腋窝皮下，建成实体型荷瘤鼠模型，24h后随机分为五组，即模型对照组、顺铂（1mg/kg）组、顺-1-1-1铂联合高（168.4mg.ml）、中（84.2mg.ml）、低（42.1mg.ml）剂量十全大补汤总多糖组。十全大补汤总多糖采取灌胃给药，0.5ml/只，1次/d，10d后眼球放血处死小鼠，称取体重和瘤重，计算抑瘤率；分离

5、血清，并分别制备肿瘤细胞和脾细胞悬液，流式细胞仪检测肿瘤细胞和脾细胞的凋亡；ELISA法检测血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α含量。结果：1.不同浓度的十全大补汤总多糖大鼠含药血清对H22细胞的增殖有一定抑制作用，且随着作用时间的延长，抑制率明显增加，在作用的72h最高；2.48h和72h的10%含药血清、20%含药血清、40%含药血清的剂量组刺激小鼠脾细胞分泌的IL-2比对照组明显增多，以40%含药血清组最强；3.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组小鼠体重均高于顺铂组，而顺铂联合中、高剂量多糖组的瘤重均低

6、于顺铂组；I摘要4.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组肿瘤细胞的凋亡率明高于顺铂组，而脾细胞的凋亡率均明显又低于顺铂组；5.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组荷瘤小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌水平均明显高于顺铂组。结论：1.十全大补汤总多糖含药血清在体外可明显抑制H22肝癌细胞的增殖；并可促进脾细胞增殖及IL-2的分泌，呈剂量依赖性；2.十全大补汤总多糖可促进顺铂诱导肿瘤细胞凋亡；并能保护顺铂对脾细胞的损伤作用，促进荷瘤小鼠IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌，与顺铂联合应用具有减毒增效作用。

7、关键词：十全大补汤总多糖；抗肿瘤活性；细胞凋亡；免疫功能；细胞因子IIAbstractAbstractObjective:Tostudytheanti-tumoractivitiesandimmunomodulatoryeffectoftotalpolysacharideofShiquandabutang(TPS)bothinvivoandinvitro,andtoprovidetheexperimentalbasisfortheclinicalapplicationofShiquandabuDecoctio

8、n.Methods:1.In-vitrostudies:ShiquandabuDecoctionpolysaccharidewereextractedandtheserumofratscontainingShiquandabuDecoctionpolysaccharidewasprepared.1.1100μLof1×105/mlH22cellswereculturedin96-wellscultu