小半夏加茯苓汤对h22荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用

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1、CMYK1290实用医学杂志２０１１年第２７卷第７期·中医中药·小半夏加茯苓汤对Ｈ２２荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用蔡琨冯泳何前松刘蕾摘要目的：探讨小半夏加茯苓汤对Ｈ２２肿瘤的抑制作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：建立Ｈ２２荷瘤小鼠模型，观察小半夏加茯苓汤的抑瘤作用及瘤组织中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）蛋白表达情况；同时检测免疫器官指数、Ｔ淋巴细胞增殖功能和血清中肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ鄄α）含量。结果：小半夏加茯苓汤高剂量对小鼠Ｈ２２移植瘤有明显抑制作用，抑瘤率为１３．７％，ＰＣＮＡ蛋白表达与对照组比较差异有显著性，同时脾脏指数

2、、脾细胞刺激指数和血清中ＴＮＦ鄄α等指标均显著高于对照组。结论：小半夏加茯苓汤可以抑制模型鼠肿瘤的生长，增强荷瘤小鼠的免疫功能。其机制可能是通过激活免疫细胞、调节机体的免疫功能达到有效控制肿瘤细胞增殖的作用。关键词小半夏汤；茯苓；Ｈ２２荷瘤小鼠；免疫调节小半夏加茯苓汤出自张仲景《金匮要略》第１．４实验方法３０、４１条。全方由半夏、生姜、茯苓组成，目前文１．４．１荷瘤小鼠模型的建立参照文献［２］方法献［１］研究表明方中三味药分别具有不同程度的抗无菌抽取腹部接种Ｈ２２瘤株７ｄ的种鼠腹水，用肿瘤及免疫调节作用，但未见该复方抗肿瘤作用无菌生

3、理盐水调瘤细胞浓度为１×１０７／ｍＬ，每只的报道。鉴于此，本研究对小半夏加茯苓汤的抗肿小鼠右腋下接种相应瘤细胞液０．１ｍＬ。瘤及免疫调节作用做了深入研究，旨在为进一步１．４．２分组及给药腋下接种瘤细胞液后随机研究该复方抗肿瘤作用和临床运用该复方预防化分为５组，每组８只，分别为荷瘤对照组、中药高疗呕吐、抗肿瘤提供参考。剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、环磷酰胺１材料与方法组。于接种肿瘤后次日给药，中药高、中、低剂量１．１动物及瘤株昆明系小白鼠，雌性，体重１８组分别灌胃小半夏加茯苓汤煎剂４０、２０、１０ｇ／ｋｇ；～２２ｇ，由军事医学科

4、学院实验动物中心提供，动对照组灌胃等量生理盐水；环磷酰胺组腹腔注射物许可证号：ＳＣＸＫ鄄（军）２００７－００４；Ｈ２２瘤株由中环磷酰胺溶液２０ｍｇ／ｋｇ。各组每日给药１次，连国医学科学院肿瘤研究所提供。续给药１０ｄ。１．２药物和试剂小半夏加茯苓汤由半夏１８１．４．３抑瘤率及免疫器官指数各组小鼠末次ｇ、生姜１５ｇ、茯苓９ｇ组成，传统方法水煎（１给药次日，称重后处死小鼠，剥离肿瘤，称瘤重、ｇ生药／ｍＬ）。环磷酰胺注射剂（江苏恒瑞医胸腺重及脾重，计算并比较各组抑瘤率及免疫器药）；ｍｏｕｓｅＴＮＦ鄄αＥＬＩＳＡ试剂盒（达科为公官指数。司）；

5、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）一抗、ＳＡＢＣ即用１．４．４Ｔ３［３］淋巴细胞增殖实验（Ｈ鄄ＴｄＲ掺入法）型免疫组化染色试剂盒、ＤＡＢ显色剂（中杉金根据文献［４］方法无菌摘取小鼠脾脏，用含１０％桥）。小牛血清ＲＰＭＩ１６４０培养基将其制备成密度为４培养箱、细胞收集器、β液闪计６１．３仪器ＣＯ２×１０／ｍＬ的单细胞悬液，加入９６孔培养板（１００数仪、酶标仪、低温超速离心机、电子天平、倒置μＬ／孔）。实验孔每孔加含ＣｏｎＡ的完全１６４０培养相差显微镜、组织切片机等。基１００μＬ，使其终浓度为５μｇ／ｍＬ，对照组每孔加完全１６４０培养基１００μ

6、Ｌ，每组设３个复孔。将培养板置于ＣＯ２培养箱中培养４４ｈ后每孔加入ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６鄄５７２５.201１.０７.0６９２０μＬ３Ｈ鄄ＴｄＲ（１μＣｉ／ｍＬ），继续培养８ｈ后在β基金项目：贵州省优秀科技教育人才省长资金课题［编号：黔液闪计数仪上测定每个孔的ｃｐｍ值。用实验孔和省专合字（２００６）５０号］对照组的ｃｐｍ值比较计算出每个样品的刺激指作者单位：５５０００１贵州省贵阳中医学院形态实验室通信作者：冯泳Ｅ鄄ｍａｉｌ：ｆｙ６６８＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ数。万方数据CMYK实用医学杂志２０１１年第２７卷第７期12

7、91１．４．５外周血肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ鄄α）含量测表１小半夏加茯苓汤对小鼠Ｈ２２移植瘤生长定小鼠眼球取血，离心分离血清，采用双抗体夹的影响ｘ±ｓ心ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＮＦ鄄α的含量，严格按说组别ＰＣＮＡ标记指数（％）瘤重（ｇ）抑瘤率（％）明书操作，酶标仪４５０ｎｍ检测Ａ值，建立标准曲荷瘤对照组６５．１３±１０．１２１．８２±０．３３中药高剂量组４６．８８±１４．０３鄢１．５７±０．１６鄢１３．７线Ｙ＝７５４．５９Ｘ－７．３８。根据标准曲线测算各组中药中剂量组５９．３７±１２．７９１．６４±０．１３＃９．９ＴＮＦ鄄α的含量（

8、ｐｇ／ｍＬ）。中药低剂量组６４．２５±９．７８１．８１±０．１４０．５１．４．６ＰＣＮＡ免疫组化检测小鼠处死后仔细剥环磷酰胺组３２．８７±１２．１５鄢０．６５±０．０２鄢６４．３离肿瘤，常规石蜡包埋，以抗ＰＣＮＡ的抗体为一Ｆ值１３．６