dc在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验研究

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1、分类号：密级：学号：2010109163单位代码：10759石河子大学硕士学位论文DC在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验研究学位申请人付燕指导教师高晓唯教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称眼科学研究方向眼表疾病与白内障治疗所在学院医学院中国·新疆·石河子2013年5月AnExperimentResearchonTheImmunomodulationofDendriticCellsonHigh-riskCornealAllograftRejectionADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialF

2、ulfillmentoftheRequirementsForTheDegreeofMasterofMedicineByFuYan（Ophthalmology）DissertationSupervisor:Prof.GaoXiao-weiMay,2013石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用

3、授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日目录中文摘要……………………………………………………………………………Ⅰ英文摘要……………………………………………………………………………Ⅱ英文缩略词…………………………………………………………………………Ⅲ前言……………

4、……………………………………………………………………1技术路线图…………………………………………………………………………3材料与方法…………………………………………………………………………4结果…………………………………………………………………………………15讨论…………………………………………………………………………………22结论…………………………………………………………………………………32参考文献……………………………………………………………………………33附图…………………………………………………………………………………37综述…………………………………

5、………………………………………………44致谢…………………………………………………………………………………51作者简介……………………………………………………………………………52论文评阅……………………………………………………………………………53摘要目的：培养和诱导大鼠骨髓来源的树突状细胞（dendriticcell，DC），研究未成熟树突状细胞（immaturedendriticcell，imDC）对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用，探讨imDC诱导免疫耐受的机制。方法：联合应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macropha

6、gecolonystimulatingfactor，GM-CSF）和白细胞介素（Interleukin，IL）-4培养、诱导、扩增大量的imDC，肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor，TNF-α）诱导其成为成熟树突状细胞（maturedendriticcell，mDC），结合形态学、细胞表面标志加以鉴定；以60只SD大鼠为受体，30只Wistar大鼠为供体，碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组和mDC组，每组20只；对照组：术前7d经尾静脉注射PBS液0.1ml；imDC6组和mDC组分别于术前7d经尾静脉

7、注射体外培养的供体骨髓来源的imDC和mDC1×10个。术后每日裂隙灯下观察各组角膜植片存活情况并评分；于术后3d、7d、14d三个时间点，每组随机处死4只受体大鼠，取角膜植片行HE染色；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测角膜植片Th1型细胞因子（IL-12、IL-15、IL-18）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）mRNA表达水平；蛋白印迹法（Westernblot）分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3的表达。结果：通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子，培养、诱导、扩增

8、大量的DC