gsk3抑制剂对水牛类胚胎干细胞培养效果的影响

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1、分类号——UDC密级硕士学位论文GSK3抑制剂对水牛类胚胎干细胞培养效果的影响劳艳萍论文答辩日期2Q13生鱼旦三旦学位授予日期答辩委员会主席庄直缝熬援广西大学学位论文原创性和使用授权声≯2_984IIl／llM9119Illlllf卿㈣㈣本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。

2、本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。／哳保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：指导教师签名：作者联系电话：15977758519日期：矽侈．多．侈．日期：劢／弓．彩．哆．电子邮箱：la0062@1

3、63．comGSK3抑制剂对水牛类胚胎干细胞培养效果的影响摘要本研究拟通过添加GSK3特异性抑制剂BIO和CHIR99021，探讨Wn邯．catenin信号通路在水牛类胚胎干细胞(水牛类ES细胞)增殖与分化过程中的作用及其调控的分子机制，进而优化水牛类ES细胞的培养体系。本研究分为以下四个试验。试验一探讨了GSK3抑制剂对水牛类ES细胞原始克隆形成的影响。在培养液中添加0．5“#mLBIO或5mmol／LCHIR99021对水牛囊胚的内细胞团贴壁率无显著影响(91．18％和92．98％VS94．59％，P>0．05)，但添加C

4、HIR99021的原始克隆形成率(77．7l％)显著高于对照组(55．41％，PO．05)。试验二比较了GSK3抑制剂对水牛类ES细胞原始克隆增殖及传代效果的影响。通过水牛类ES细胞原始克隆增殖率的Brdu免疫荧光检测结果发现，CHIR99021组第1、3、4、5天显著高于对照组(尸<0．05)，而BIO组第1天显著高于对照组(P<0．05)，其它天数差异不显著(P>0．05)。水牛类ES细胞原始克隆平均直径测量结果显示：CHIR99021组显著大

5、于对照组(203．41gmVS128．01gm，P<0．05)，BIO组(166．64gn)大于对照组，但差异不显著(P>0．05)。同时，与增殖相关基因PCNA表达的qRT．PCR检测结果发现，BIO和CHIR99021组的PCNAmRNA相对表达量显著高于对照组(P<0．05)。此外，对B10处理组、CHIR99021处理组、对照组的克隆分别进行传代培养发现：对照组和BIO组目前传至10代、10代，而CHIR99021组目前传至11代。试验三研究了GSK3抑制剂对水牛类ES细胞多能性标志基因表达的影响。Oct4、Sox2、

6、NanogmRNA相对表达量的qRT．PCR检测结果发现，CHIR99021组的Oct4、Sox2显著高于对照组(P<0。05)，Nanog与对照组差异不显著(P>0．05)；BIO组Oct4显著高于对照组(P

7、—MycmRNA的表达发现，BIO和CHIR99021组显著高于对照组(P<0．05)。上述研究结果表明，GSK3抑制剂(CHIR99021和BIO)对水牛类ES细胞增殖和多潜能性的维持具有促进作用，能提高水牛类ES细胞中lB-Catenin和c．Myc的表达，且CHIR99021的效果优于BIO。说明Wnt／13．catenin信号通路对水牛类胚胎干细胞自我更新起着重要的作用。关键词：水牛胚胎干细胞Wnt／13一cateninGSK3BIOCHIR99021IIEFFECTSoFGSK3INHIBIToRoNTHEPLURI

8、POTENCYMAINTENANCEoFBUFFALOEMBRYONICSTEMCELL．LIKECELLSABSTRACTInthisstudy，toexploretheeffectsandmechanismofWnt／I]一catemnsignalingpathwayon