大鼠Gsk3β基因过表达及Gsk3β抑制剂SB216763对肝卵圆细胞增殖的影响

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1、温州医学院硕。卜学位论文答辩委员会成员(按姓氏笔画排名)：论文答辩日期：四l迎5．262温州医学院硕士学位论文目录英文缩略词中英文参照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯04一、摘要1、中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯052、英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯07二、正文1、前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯092、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103、结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯234、分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯305、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33三、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37五、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38六、独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯473㈣坐螂一温州医学院硕士学位论文英文缩略词中英文参照表英文缩写英文全称中文全称DMEMDulbecco’SModifiedEagleMediaDMEM细胞培养基FBSfetalbovineserum胎牛血清PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液DMSOdimethylsulfoxide二甲基亚砜WB

3、Westernblot免疫蛋白印迹实验CCK-8CountingKit—。8Assay细胞活性计数试剂盒PIPropidiumIodide碘化丙啶TriStris(hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷APAmmoniumpersulfate过硫酸铵ddH20deionizedwater去离子水TBSTriSbuffersalineTris缓冲液TEMEDN，N，N’，N’一Tetramethylet}1ylenediamine四甲基乙二胺FCMflowcytometry流式细胞术PCRpolymerasechainreaction聚合酶链

4、反应PVDFPolyvinylidenefluoride聚偏氟乙烯转移膜LvLentivirus慢病毒EGFPEnhancegreenfluores．centprotein增强绿色荧光蛋白PGC—FU—Gsk3Gsk3BoverexpressionlentiviralGsk3D基因过表达重组13vector慢病毒载体Gsk3BGlycogensynthasekinase——3beta糖原合成酶激酶3BSDS-PAGEsodiumdodecyl—sulfatep01yacrylamide十二烷基磺酸钠一聚丙gelelectrophoresiS烯酰胺凝胶电泳WNTcells

5、ignalingWNT细胞信号rpmrotationperminute每分钟转速ODOpticaldensity光密度值TUTransfatedUnit转导单位MOImultiplicityofinfection感染复数4温州医学院硕士学位论文大鼠Gsk313基因过表达及Gsk3B抑制剂SB-216763对肝卵圆细胞增殖的影响中文摘要目的：1．研究Gsk3B基因过表达通过Wnt信号通路对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响及其调控机制；2．研究Gsk313抑制剂SB-216763通过Wnt信号通路对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响及其调控机制。方法：1．构建并鉴定大鼠Gsk3B基因过表达慢

6、病毒载体PGC—FU-Gsk3B—EGFP，检测该慢病毒的转染效率，并筛选其处理肝卵圆细胞的最佳感染复数(MOI)；2．配制不同浓度的Gsk3B抑制剂SB一216763，并筛选抑制剂SB一216763处理肝卵圆细胞的浓度梯度；3．实验分组：将大鼠肝卵圆细胞WB-F344分为空白慢病毒载体对照组、Gsk3B基因过表达慢病毒载体组，以及DMSO对照组SHGsk3B抑制剂组，其中抑制剂组SB一216763设立4个浓度梯度，即0．5、1．0、5．O、10．0umol／L；4．将大鼠6sk3B基因过表达慢病毒载体和空白慢病毒载体与大鼠肝卵圆细胞系WB—F344共培养，在相差倒置显

7、微镜和荧光显微镜下分别观察两组细胞形态及其生长状态，以及慢病毒感染后细胞的荧光表达情况；5．将各个浓度梯度的Gsk3B抑制剂SB-216763(即浓度分别为0、0．5、1．0、5．0、10．0umol／L)与大鼠肝卵圆细胞系WB-F344共培养，在相差倒置显微镜下观察各个抑制剂组细胞形态及其生长状态；6．采用细胞活性计数试剂盒(CCK-8试剂盒)检测Gsk3B基因过表达慢病毒载体和空白慢病毒载体及各个浓度梯度的Gsk313抑制剂SB-216763对大鼠肝卵圆细胞系WB—F344增殖的影响，AnnexinV—FITC／PI流式凋亡试剂盒检测