肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(trail)偶联物的设计及其特异性抗肿瘤作用研究

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1、⑧论文作者签名：违约主刍万方数据指导教师签名：论文评阅人1：丞自隐垒评阅人2：丞自降垄评阅人5：丞自睦垄委员l：逃董墨熬援逝塑太堂丝堂王猩生生堑王猩堂丕委员2：塑益国筮援逝江王些太堂垒堑皇巫埴三猩堂睦委员3：萱苤熬援逝塑盘堂荭堂睦答辩日期：2Q!垒生鱼目鱼旦万方数据Author’SsignatureSupervisor’SsignatureThesisreviewer1．一一』垫Q望)型坠i鲤Thesisreviewer2-．一一』纽Q型迦!YThesisreviewer3：』也Q坠丝皿i鲤Thesisreviewer4．Thesisreviewer5：丛Q

2、塾卫坠i!YChair：￡!Q￡￡鲢塾至笪，圣h自i垫g堕垡Y曼竖i垃Committeemanl：￡塑￡)巨殴曼h9墼ii望g，Zh自i垒塾g!=互亘Yl堕直垃Committeeman2．Prof．ZhengYuguo,ZheiiangUniversityofTechnologyCommitteeman3：￡嫂￡圣鲤g墨旦，至堡自i塑g堕坠i!丛§i垃．一Committeeman4：￡煦￡垫堑』i吐i旦Q，圣h娅塑g堑也Y笪si鲤Dateoforaldelense：2014．06．06万方数据浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导

3、师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝婆太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：C丕纠芗歇签字日期：矿】丫年‘月f7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝塑太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝婆太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存

4、、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：C为粥钦导师签名签字日期：如ff年舌月f7日签字日期：万方数据逝姿盍堂遣±堂焦诠塞煞邀致谢衷心感谢我的导师陈枢青教授!感谢陈枢青教授对我的知遇之恩，以及在我攻读博士学位期间的耐心指导。您开阔的学术视野、活跃的学术思维是我今后努力的方向!感谢您五年来在学习和生活各方面对我的悉心指导和谆谆教诲。本研究从课题的设计，实验工作的展开到论文的撰写，无不凝聚着陈老师的智慧和心血。感谢那仁满都拉教授在实验设计与论文写作方面的指导与帮助!感谢徐迎春老师和孙红颖老师在日常工作以及生活中给予的帮助、支持和照

5、顾!感谢上海ABSCIEX公司谢永明老师在质谱检测相关工作中给予的技术支持!感谢浙江海正药业有限公司在圆二色谱和表面等离子共振实验中给予的技术支持!感谢谢章明、来俊在动物实验中给予的大力帮助!感谢沈其、吴敏、黄鹏在重组质粒构建以及重组蛋白表达纯化中给予的指导!感谢李朝辉、张骞在蛋白质偶联技术方面提供的帮助!感谢苗正伟博士提供小分子毒素!感谢生化药学教研室的所有师兄师姐师弟师妹们陪我度过了难忘的求学生涯，感谢你们在学习和生活中的热心帮助!感谢我的家人多年来的宽容和鼓励!万方数据逝望态堂遵±堂焦逢塞生塞煎墨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)偶联物的设计及

6、其特异性抗肿瘤作用研究中文摘要1．TRAIL．NCl和TRAIL．TD融合蛋白的设计与复性肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNFrelatedapoptosis—inducingligand，TRAIL)是TNF超家族的一员，由于其能选择性杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无害而被视为有潜力的抗肿瘤蛋白药物。TRAIL能通过与肿瘤细胞细胞表面的死亡受体结合，从胞外途径传递死亡信号，最终诱导细胞凋亡。然而，目前常见的一些重组TRAIL均存在同样的问题：不稳定和半衰期短。为了克服这些问题，研究者们制备了许多带标签的重组TRAIL融合蛋白，如His-TRAIL，F

7、lag．TRAIL，LZ．TRAIL和iLZ．TRAIL，旨在增强TRAIL的稳定性和活性，另外也是为了纯化方便的考虑。遗憾的是，虽然这些TRAIL融合蛋白表现出极强的肿瘤细胞诱导凋亡能力，同时却也引起了肝毒性。由于带有外源标签的TRAIL同时带有毒副作用，因此有研究者采用内源的融合片段(humanpulmonarysurfactant．associatedproteinD)来制备具有双重功能和更高凋亡活性的TRAIL融合蛋白。综上，寻找内源性双功能片段作为TRAIL的融合伴侣，有望解决TRAIL半衰期短、稳定性差和肝毒性等缺点。在本章节中，我们利用来源于人

8、胶原蛋白XVIII的NCl和NCl中的三聚域(TD)