肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及受体与胰腺癌的相关性研究

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1、华中科技大学博士学位论文肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及受体与胰腺癌的相关性研究姓名：陈鑫申请学位级别：博士专业：普通外科学指导教师：王春友2003.4.1Doxorubicin5．FluorouraciIMitomycinCDeathReceptorDeathReceptor4DeathReceptor5DecoyReceptor1DecoyReceptor2DeathDomainInhibitionRate缩略语表FluorescenceisothiocyanateFADDlikeICEinhibitoryprote

2、insReverseTranscriptionPolymeraseChainReactionTumorNecrosisFactorRelated·-apoptosisInducing·-ligandDOX5．FUMMCDRDR4DR5DcRlDcR2DDIRFITCFLIPsR，r．PCRTRAIL竺±型苎查兰型堑垦兰堕竺!：堕塑兰望些!!羔肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及受体与胰腺癌的相关性研究华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科博士研究生陈鑫导师王春友教授中文摘要胰腺癌是恶性程度最高的肿瘤之一，目前的治疗效果很不

3、理想。手术切除后5年生存率仅为15％一30％，肿瘤的生物学治疗治疗是当前肿瘤治疗的热点，肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumornecrosisfactor-RelatedApoptosis—InducingLigand，TRAIL)能够特异性的诱导肿瘤细胞的凋亡，而对正常细胞及组织无凋亡作用。TRAIL这一生物学特点是与TRAIL有多种”^“配体，而且在不同的细胞组织中的表达不同有关。本课题重点探讨TRAIL受体在胰腺癌组织、细胞及『F常胰腺组织中的表达以及TRAIL对胰腺癌细胞的凋亡作用，并初步探讨引起凋亡的细胞内

4、信号传导机制。，．I方法：用RToPCR、Northmblot方法检测了新鲜胰腺癌、正常胰腺组织标本双及胰腺癌细胞PC3、Pancl中TRAIL的四种受体的表达情况，即死亡受体DR4、DR5和假受体DcRl、DcR2；用MMT法、Hoechest33258、DNALadder法以及流式细胞仪测定凋亡的方法检测不同浓度TRAIL对胰腺癌细胞PC3、Pancl的凋亡作用。用MTT法、流式细胞仪检测了TRAIL与5一氟脲嘧啶(fluorouracil)；TRAIL与丝裂霉索C(mitomycinC)：TRAIL与阿霉素(do

5、xorubicin)联合对胰腺癌Pancl的凋亡作用；用Westernblot法检测了用药前后细胞色素C及Caspase--3的表达，并测定了用药前后媾中辩技大学臻济医学院搏I：§Jf究生毕敛谂突Caspase-3的活性变化缝槊：死亡受髂DR4(TRAIL．R1)、DR5(TRAIL—R2)在麟艨漫继织、胰腺瘸细胞PC3及厩誊组织中表达+DR5来见在Pancl中表达，DcRI在正卷胰腺癌组织及以腺癞细腿Pancl中表达，骞鼹铡胰腺癌缎织中媳鸯DcRI鹣表达。Dj慰在正常胰腺缀缓有表达，DR4静表这薰在两栋蒎稼癌缨飚中不

6、弱，PC3嗣显离子PancI。不同浓发的TRAIL均可以诱导PC3、Panel的满亡，势量耥量依赖往。PC3韵凋亡率明显高予Pancl，Pancl对TRAlL诱导的凋亡不敏感。TRAIL与5一氟脲噱啶、丝袋霉索C和阿霉索联合作用于胰腺瘸细胞Pancl，发观5氟脲嘧啶和丝裂霉索C均引起Panel凋亡率的增加，照观明熙的协同作阁，而嬲霉索无明是的协同作用，用caspase搦裁剡预先鲶理缎照慝。与弱浓度载TRAIL+5氖鼹噻嚏秘TRAIL+熊裂鬈豢C处理缀棚比，PancI戆鞘亡率明聂下降，联会{乍瘸予簇艨癣缌胀居Caspas

7、e*3秘缨爨缝色豢C黪袭达鬟增嬲，Caspase．3瓣活性增麴。胃检测臻Caspase-3活毪片段。y，绪论：TRAIL溺种受体衽胰腺癌组织、细胞及讯常胰腺组织中的袭达有差辩，死亡受体主要在胰腺癌中表达，而锻受俗则在正常胰腺组织中表达。避一步证实了TRAIL对肿瘤细胞诱导凋亡的特辩性，PC3和Pancl对TRAIL诱导的凋亡的敏感性有差异，可能与DR5来见在Pancl中的袭达有关，丝裂霉索C和5氟脲囔啶的济同l乍月激活了Casepase黥级联反应，导致Panel蛇漏亡增期。TRAIL俸为～释耨发瑷豹生物索，能够在俸外诱

8、导胰腺瘗缨鼹懿熬亡，势最与5．簸繇糖啶、丝裂霉素C有协同作甭，这种协同佟弱瓣低了能疗药甥豹裁爨，蔽羲】‘隧有效璁延缓了瓣瘤缩胞对讫疗药豹多药掰翁，为瓣瘤的生物学治疗提供了一条新的途径。关键词肿瘤坏宪囱予相关凋亡诱导凝体胰原瞩_-___--__●_一__l___-一繇8攀簇列霉搴C阿簧碜半胱天冬氨酸骚碧酶一3争√、／∥2凋芒化荐5．