鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(trail-r3)酶联免疫分...

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5、、生物素化的抗TRAIL-R3抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的TRAIL-R3呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为5,000pg/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)

6、后，分别稀释成5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312pg/ml，156pg/ml，78pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制2,500pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)5,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。3.样品稀释液：1×20ml。4.检测稀释液A：1×10ml。5.检测稀释液B：1×10ml。6.检测溶液A：1

7、×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8.底物溶液：1×10ml/瓶。9.浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。10.终止液：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。11

8、.覆膜：5张12.使用说明书：1份自备物品1.酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2.微量加液器及吸头，EP管3.蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3