klf4在全反式到和pdgf调节sm22α表达中作用及机制的研究

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1、中文摘要KLF4在全反式维甲酸和PDGF调节SM22a表达中的作用及机制研究摘要血管、I￡滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMCs)表型转化在动脉粥样硬化和m管再狭窄等向．管币：塑性疾病的发，li发展r11起’币：要作刖。jF常情况卜，帆管壁tf-膜的VSMC呈分化农慢，也称收缩农型，表达SMa-actin、SM—MHC和SM22a等、}￡滑肌特异的收缩蛋白。?。j血管受剑损伤因素刺激时，VSMC可从收缩农J弘转化为合成袭J弘ji二获得增殖能力，同时SMC特异收缩蛋白的表达被m抑。虽然VSMC表型转化在血管!囊塑性疾痫的发牛发展l}

2、发挥霞要作

3、JtJ，fu．Ej前控制VSMC农型转化的确切分子yL带lJ还小足很清楚。l大1此，闸11月VSMC表燃转化的分子机制对帆雀：。币：塑性疾7丙的防治具有重要意义。、l￡滑肌22alpha(smoothmuscle22alpha，SM22a)足VSMC分化标志蛋白之一，I丈f分子量约为22-25kD而得私。令反jl=维tff酸(a11．transretinoicacid，ATRA)是维生素A的衍生物，通过与胞内受体RAR／RXR棚‘7f：作川而促进细胞分化。赢小极源件j1-‘K『大l子(platelet—derivedgrowthfactor．PDGF)是··种强效促订丝分裂剂

4、，通过与细胞膜I：的特异’f，#!受体PDGFR相瓦flq!J而促进细胞增吼。KriJppel样

5、大1子(kriJppel—likefactor，KLF)足⋯类含有锌指结构的多能转录然l子，在细胞增殖、凋亡、分化、胚胎发育以及体细胞毛编程·lI发挥币要作J{j。近年米的研究结果．!ul乃÷，KLF4作为转录冈子可“接与DNA结合调1了基I大f的发达。我室以及Owens等的研究结果证实，ATRA和PDGF—BB均丌娃著诱导KLF4表达，)i：上上KLF4在ATRA诱导SMC分化标志基J大

6、发达以及PDGF—BBJ5Ⅱ抑SMC分化标志整l大I农达tl·均发摊币：要f1；川。然而，

7、在促增矾和促分化

8、大l素f1圳】卜-，KLF4对SMC分化标志基N&达发托：／f、=附涮17作川的机制

9、f『、仃尚／f≮弩缝。／f王文系统研究KLF4祚：ATRA诱廿VSMC分化以及PDGF—BB促进VSMC增可l。【lII的作川及Je分j二fJ哺0。1KLF4在ATRA诱导VSM(’分化以及PDGF．BB促进VSMC增殖中均发挥重要作用中文摘要小部分实验以VSMC分化和去分化{ij：J：忐基I大l农达水、r作为判断VSMC农倒的指标，伶测ATRA和PDGF．BB对VSMC增吼以／艾农倒车0化的影响。通过敲低和过发达KLF4考察KLF4足禽参与ATRA诱导的VSMC分化和PD

10、GF．BB诱导的VSMC增吼。实验结果如卜．：1．1ATRA和PDGF—BB对VSMC增巯能Js的影响细胞计数和BrdU掺入分析实验结果、I眦I／J"i，ATRA能以浓度(5、10、20肛M)和兀寸间(12、24、48h)依赖的办J=弋抑制VSMC增列i，以ATRA浓度为10肛M作J}j丁VSMC48h的抑制作川最强。PDGF．BB能以浓度(5、10、20ng／mL)和时问(12、24、48h)依赖的办式促进VSMC增殖，以PDGF．BB浓度为10ng／mL作心于VSMC48h的促增玎ifl．．Jl_J敲强。1．2ATRA和PDGF—BB对KLF4和VSMC农燃标志基l捌表达

11、的影响Westernblot结果表明，ATRA和PDGF．BB均几丁显著诱甘KLF4农达，并具有明业I：I的时效(12、24、48h)和最效(5、10、20“M或5、1O、20ng／mL)关系。SM22仪表达是VSMC处丁分化状态的币娑分子标志，PCNA农：达足VSM("处丁增殖：I犬念的。匝娑分子标志。采川Westernblot方法，榆AATRA和PDGF．BB对VSMC表型标志基I大1表达的影响。结果显／Jj，在ATRA处理的VSMCI：{I，分化标志基l大lSM22a表达11月!＆升高，增列e标忐物PCNA表：达!以著降低；然而，在PDGF．BB处理的VSMCL}一，S

12、M22cz的太达明姓降低，PCNA表达U著升高。1．3敲低或过表达KLF4对VSMC分化标志基I大J表达以及应力纤维形成的影响将靶向KLF4的小十扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)．导入VSMC，阻断内源性KLF4表达后，研究KLF4在ATRA诱导VSMC分化以及PDGF．BB诱甘VSMC增列fl

13、t的作川。前先我们证实，转染KLF4．siRNA‘nJ．使KLF4蛋白农达水、I￡降低75～80％，农l归陔基IxI的表达被彳J‘效敲低。Westernblot与魁笆s+J=lk染