tlr9在食管癌发生及进展中的作用研究

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1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：2010009宁夏医科大学硕士研究生学位论文TLR9在食管癌发生及进展中的作用研究EffectsofTLR9ontheonsetandprogressionofesophagealcancer学位申请人：崔柳指导教师：张艳丽副教授申请学位门类级别：医学专业名称：病原生物学研究方向：肿瘤免疫所在学院：基础医学院论文完成日期：二〇一三年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeEffectsofTLR

2、9ontheonsetandprogressionofesophagealcancerStudent’sName:CuiLiuSupervisor：ZhangYanliAssociateProfessorSubjectCategory:MedicineMajor:PathogenyBiologySpecialty:TumorImmunityCollege:BasicmedicalcollegeCompletionDate:April.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取

3、得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保

4、存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要TLR9在食管癌发生及进展中的作用研究摘要目的本课题以食管癌TE10细胞株和食管癌病理标本为研究对象，观察TLR9在食管癌细胞和组织中的表达、TLR9激动剂(Cytosinephosphateguanosineoligodinucleotide,CpGODN)，抑制剂氯喹（chloroquine,CQ）对食管癌细胞TE10增殖活性和癌细胞迁移的影响，探讨TLR

5、9的表达与食管癌临床病理特征的相关性，为食管癌的临床免疫治疗提供新的思路和策略。方法（1）RT-PCR法测定食管癌细胞TE10TLR9mRNA的表达，采用Western-blot方法和流式细胞术（FCM）检测其TLR9蛋白表达。（2）用TLR9的非特异性抑制剂CQ10µM预处理TE10细胞1h后再加10μg/mLCpGODN分别作用于TE10细胞12h、24h和48h后，MTT法检测食管癌细胞的增殖活性。（3）运用RT-PCR法检测TLR9激动剂/抑制剂对TE10细胞基质金属蛋白酶(matrixmetalloproyeinse,MMPs)MMP

6、-2mRNA、MMP-7mRNA和环氧化酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）mRNA表达的影响。（4）细胞划痕实验观察TLR9的表达在食管癌细胞迁移中的作用。（5）采用ELISA方法检测CpGODN对TE10细胞分泌核因子-κB（NF-κB）p65水平的影响。第二部分：收集临床上未经化疗和放疗的食管癌标本60例，行组织分型和临床分期，同时取癌旁组织30例（均证实无癌细胞），行常规石蜡包埋、切片，免疫组化法（SP法）检测食管癌组织和癌旁组织TLR9的表达，分析TLR9的表达与食管癌临床病理特征的相关性。结果（1）RT-PCR法检

7、测到食管癌细胞TE10上有TLR9mRNA的表达，Western-blot方法和流式细胞术观察到TE10细胞表达TLR9蛋白。（2）MTT法结果表明，CpGODN作用TE10细胞24h和48h均能显著促进TE10细胞的增殖，而经CQ预处理的TE10细胞未见CpGODN促进癌细胞增殖的作用。（3）RT-PCR检测结果显示，CpGODN可促进TE10细胞MMP-2mRNA、MMP-7mRNA和COX-2mRNA的活性表达，且作用的同一时间段内具有量-效关系。（4）细胞划痕实验结果表明CpGODN可促进TE10细胞IV宁夏医科大学硕士研究生学位论文中

8、文摘要的迁移，且具有量-效关系。（5）ELISA方法检测到20μg/mLCpGODN作用TE10细胞的12h和24h均能促进、提高其分泌NF-κBp6