pten与aktmtor通路在食管癌进展中的研究

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2、本论文由本人独立撰写，文责自负。蹴蝼轹嘶毒师签章：卅呼如／弓年弓月／26日＼．、目录IUlIIIIIHllMUIIIY2337330中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文PTEN与AKT／mTOR通路在食管癌进展中的研究—1上．—jL日!J吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯_⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．23附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54中文摘要PTEN与AKT／mTOR通路在食管癌进展中的研究摘要我国是世界上食管癌的高发区，其最常见的组织学类型是鳞状

4、细胞癌。尽管食管电子内镜检查和黏膜活检是高危人群筛查和早期发现诊断的有效手段，但并没有作为普查手段在食管癌高发区推广使用，因此大部分食管癌患者早期发现困难，病人就诊时部分已是中晚期，预后不佳。大量分子生物学研究资料表明，食管癌的发生、发展是多阶段、多基因参与，多种转录因子共同调控的过程，然而其确切的发病机制尚不清楚。因此，研究食管癌进展过程中细胞内各种信号转导通路的异常活化(ERK通路、AKT／mTOI通路)及新型抗肿瘤药物的靶点，依然是临床治疗食管癌的主要目标。多个研究报道证明，AKT／mTOR信号传导通路在肿瘤发生发展中存在异常的激活。同样，在食管癌的发生过程中也证实

5、了存在此通路的持续激活，进而导致食管癌的发生。AKT／mTOR通路介导肿瘤发生发展的主要机制是抑制细胞凋亡、促进细胞增殖、调控细胞周期，促进肿瘤的血管化以及恶性侵袭与转移。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR是P13K／AKT的下游信号分子，参与调节细胞的生长发育、迁移侵袭，在肿瘤进展中表达异常升高，提示mTOR异常激活与肿瘤发生有关。PTEN是目前为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，且同时具有脂质酶活性，在多个恶性肿瘤中存在异常的突变或功能缺失。近年来研究表明，PTEN能够负向调节AKT／mTOR通路，降低p-AKT活性分子水平，抑制下游信号通路的异常表达，从而达到诱导

6、细胞凋亡，抑制细胞增殖的作用。本实验分别转染高活性的PTEN质粒、Sh．AKT质粒(沉默p-AKT)及mTOR质粒至人食管癌细胞中，测定细胞内PTEN、AKT／p．AKT、mTOR发生的一系列分子、蛋白水平及食管癌细胞增殖能力的变化，更深入的了解PTEN对AKT／mTOR通路以及食管癌细胞增殖的影响，为临床治疗食管癌提供可靠的理论依据。目的：探讨转染PTEN质粒、sh-AKT质粒及mTOR质粒对AKT／mTOR通路以及食管癌细胞增殖的影响。中文摘要方法：1扩增PTEN质粒，使用RT-PCR检测转染组较其他两组细胞内PTEN、AKT及mTOR分子水平的区别以及使用Weste

7、rnBlot方法检测转染组较其他两组细胞内PTEN、p-AKT蛋白水平的区别。2扩增shAKT质粒，使用RT-PCR测定转染组较其他两组细胞内PTEN、AKT及mTOR分子水平的区别以及使用WesternBlot方法检测转染组较其他两组细胞内PTEN、p-AKT蛋白水平的区别。3扩增PTEN质粒，细胞计数法及MTT检测转染组较其他两组食管癌细胞增殖能力的区别。4扩增mTOR质粒，通过RT．PCR方法检测转染组较两组分子水平mTOR的区别。结果：1．转染PTEN及sh．AKT质粒对人食管癌细胞AKT／p．AKT的影响RT-PCR