wnt1在卵巢癌skov3细胞系干细胞中的作用机制

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1、中图分类号密级Wntl在卵巢癌SKOV3细胞系干细胞中的作用机制MechamismresearchontheroleofWntlinovariancancerstemcells计：学位论文：85页表格：7个插图：14幅王丽霞指导教师：李连宏教授申请学位级别：博士学位学科(专业)：病理学与病理生理学培养单位：大连医科大学完成时间：--0一二：年四月答辩委员会主席：I㈣唧炒独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位做作者签名：j葡R签字日期：芝二二年』月二9关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段

3、保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√")：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密口。作者签名：导9∑徐日期：出l；年r胪日日辫薹≥尸，1专年t月知日lO目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第一部分Wntl在卵巢癌SKOV3细胞系干细胞中的表达及其作用机制(～)前

4、言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．1细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．2主要试剂和仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯91．3主要试剂的配置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1l2．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯·⋯⋯··122．1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2免疫磁珠筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．3

5、细胞免疫组化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．4细胞RNA抽提⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132．5RT—PCR⋯···⋯⋯·⋯··⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯·⋯·一·⋯··142．6Westernblot检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯153．统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．CDl33+细胞分选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．1卵巢癌悬浮细胞球形成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161．2CDl33+细胞分选结

6、果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．Wntl及13．cateninmRNA在各组细胞中表达情况⋯⋯⋯163．Wntl及B．catenin蛋白在各组细胞中表达情况⋯⋯⋯⋯17(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21第二部分RNAi沉默Wntl基因对卵巢癌SKOV3细胞影响的研究(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．1质粒、菌株及细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261，2主要试剂与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯261．3主要试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·292．1SKOV3细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．2shRNA寡核苷酸的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302．3shRNA寡核苷酸链的退火⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯302．4Wntlsh

8、RNA载体的构建和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯312．5转染和筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯332．6实时荧光定量RT．PCR⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342．7Westernblot分析⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··343．统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯361．shRNA的质量检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯362．WntlshRNA真核表达载体的构建及测序