ngr特异性sirna及nt-3基因转染对大鼠脊髓损伤修复的影响

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1、中图分类号UDCR651.2610硕士学位论文学校代码密级10533NgR特异性siRNA及NT-3基因转染对大鼠脊髓损伤修复的影响TheeffectsofNgR--siRNAandNT-3genetransfectiononspinalcordinjuryreparationinrats作者姓名:学科专业:研究方向:学院(系、所):指导教师:陈金亮临床医学外科学湘雅三医院詹瑞森教授论文答辩日期迎!垄生菇答辩委员会主中南大学2013年5月原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不

2、包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名:殛。.金应么日期:毒盟妞年二妇丝日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名:年』月望日NgR

3、特异性siRNA及NT-3基因转染对大鼠脊髓损伤修复的影响.厅汐HIuJ摘要:目的:研究NgR特异性siRNA体内干扰及NT-3基因体内转染对大鼠脊髓损伤修复的作用。方法:选用由中南大学实验动物部提供的SD大鼠108只,体重200--2509,雌雄不限。随机平均分为假手术组(n=27)、手术对照组(n=27)、NgR—siRNA组(n=27)和NgR-siRNA+NT-3组(n=27)。每组按照手术后12h、ld、2d、3d、5d、7d、14d、21d和28d9个时间点再平均分为9。个小组,每小组3只。在T8椎板水平,用做好标记的显微剪刀剪断脊髓的背侧2/3,制作大鼠半横断损伤

4、模型,用微量注射器自损伤处头尾两端缓慢注入细胞浓度1×106/ml相应细胞悬液10ul,5min内注射完毕留针5min,并用医用生物胶封闭针孔防止细胞悬液顺针道溢出。利用BBB评分评价大鼠运动功能恢复情况;相应时间点获取损伤段脊髓标本,利用QPCR、Wb测定NT-3、NgR、GAP一43基因表达的变化,综合评价RNA干扰沉默NgR基因及联合NT-3基因转染对大鼠脊髓损伤后修复的影响。所得数据采用均数和标准差进行一般描述;各组之间的比较采用方差分析,进行两两比较。结果:1、脊髓损伤术后7d、14d、21d、28dNgR—siRNA+NT-3组BBB评分明显高于NgR-siRNA组

5、、损伤对照组,有统计学差异(P<0.05)。2、QPCR结果显示:NgR.siRNA+NT-3组NT-3、GAP一43基因表达水平升高更明显,有统计学差异(P<0.05);NgR—siRNA+NT-3组NgR基因表达水平下降更明显,有统计学差异(P<0.05)。3、Wb结果显示,NgR—siRNA+NT-3组损伤后NT-3、GAP一43蛋白表达增高最明显,有统计学差异(P<0.05);NgR.siRNA+NT-3组NgR蛋白表达下降最明显,有统计学差异(P<0.05)。结论:RNA干扰沉默NgR基因及联合NT-3基因转染,可改善NgR受体相关髓磷脂抑制因子的作用及NT-3增加神

6、经营养作用可促进脊髓损伤的修复。图22幅,表7个,参考文献41篇关键词:NgR基因;NT-3基因;siRNA;基因转染;脊髓损伤分类号:R651.2TheeffectsofNgR—siRNAandNT-3genetransfectionOilspinalcordinjuryreparationinratsABS’I’RACT:Objective:TostudytheeffectsofNgR.siRNAandNT-3genetransfectiononspinalcordinjuryreparationinrats.Method:108SDratsfromDepartmentof

7、LaboratoryAnimalofCentralSouthUniversitywerechosed,ofwhichweightsvariedform200—2509,maleorfemale.Theseratswererandomlydividedintoshamegroup(n-27),operationgroup(11:-27),NgR—siRNAgroup(n_27)andNgR—siRNA+NT-3group(n=27).Eachgroupwasdividedinto9subgro

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