组织工程技术构建下鼻甲骨治疗萎缩性鼻炎临床的研究

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1、上海第二医科大学硕士学位毕业论文组织工程技术构建下鼻甲骨治疗萎缩性鼻炎的临床研究中文摘要萎缩性鼻炎是耳鼻咽喉科常见病，分原发性与继发性两种。表现为鼻腔黏膜、黏膜下和(或)下鼻甲的萎缩性改变，患者存在不同程度的吸气时鼻痛、头痛，鼻、咽干燥，鼻腔结痂等症状，严重影响生活质量。长期以来，医学工作者一直致力于其治疗的研究，各种药物治疗与手术治疗方法应运而生，但均存在或多或少的不足与并发证。能否找到一个更加理想的治疗途径呢?近年来，组织工程的兴起让我们看到了希望。【目的】本研究采用经体外成骨诱导的自体骨髓基质细胞(menchymalstemcells，MSC

2、s)为种子细胞，部分脱钙骨(Partlydemineralizedbonematrix，pDBM)为支架材料构建组织工程骨。研究MSCs体外成骨诱导和鉴定，及其在pDBM上的接种形成组织工程骨，探索利用组织工程技术在人体内形成组织工程骨构建下鼻甲临床治疗萎缩性鼻炎的可行性，为组织工程技术广泛应用于临床打下基础。【材料和方法】1人骨髓基质细胞体外成骨的诱导和鉴定抽取患者骨髓以密度梯度法分离出骨髓基质干细胞，用流式细胞仪检测MSCsCDl05，CDl66，CD29的比例：成骨诱导培养和表型鉴定：计算各代倍增时间和3代总的扩增倍数，茜素红染色、四环素荧光

3、观察钙结节，免疫荧光检测I型胶原、骨钙蛋白、成骨细胞转录因子，RT-PCR检测I型胶原，骨钙蛋白OCN，骨桥蛋白OPN、骨粘连蛋白ONNmRNA表达；成软骨细胞诱导培养和表型鉴定：免疫荧光检测II型胶原，SOX9，RT-PCR检测II型胶原，aggrecanmRNA：成脂肪细胞诱导培养和鉴定：油红一0染色，RT-PCR检测PPAR'12mRNA上海第二医科大学硕士学位毕业论文◎2组织工程骨临床应用治疗萎缩性鼻炎的早期探索性研究对3例萎缩性鼻炎患者(2例为原发性，重度，单侧；1例为继发性，中度，双侧)进行治疗研究。自体hBMSCs，经体外成骨诱导和扩

4、增至第3代，复合部分脱钙骨体外培养一周后，手术回植于下鼻甲内或相当于下鼻甲部位以构建下鼻甲。分别于术后1周内，1，3，6，12，18，24等月进行临床和CT检查随访。【结果】1人骨髓基质细胞体外成骨诱导和鉴定：用密度梯度法分离出人骨髓基质干细胞，流式细胞仪检测第二代细胞CDl05阳性率78±6％，CDl66阳性率43±7％，CD29阳性率69-----12％；MSCs成骨诱导培养，三代平均扩增163．4倍后，形成钙结节，骨钙蛋白(OCN)，成骨细胞转录因子(cbfal)免疫荧光结果阳性，RT-PCR证实有OCN，OPN，ONNmRNA的表达，未诱导

5、的hMSCs阴性；MSCs成软骨细胞诱导培养后，Ⅱ型胶原、SOX9免疫荧光结果阳性，RT-PCR证实II型胶原、aggrecanmRNA的表达，未诱导的hMSCs阴性：MSCs成脂肪细胞诱导培养后，油红一0染色阳性，RT-PCR证实PPAR72mRNA的表达，未诱导的hMSCs阴性。2组织工程骨临床应用治疗萎缩性鼻炎的早期探索性研究三例患者均在1月后主观症状明显改善，3月后基本消失，检查示鼻腔粘膜光滑，色泽红润，鼻中隔．下鼻甲距离在0．3～0．4cm之间，均达到痊愈效果。以后的随访发现下鼻甲未再萎缩，光滑，色泽红润，与正常下鼻甲相仿。CT影像学显示

6、回植1周内组织肿胀，植入之hMSCs—pDBM复合物与自体骨相分隔，一月后已相连相融，3月后融合更加紧密，6月以后基本与原位骨组织不易区分，可见构建之下鼻甲形态。回植后1月后CT值稳定，与自身下鼻甲骨密度接近。术后1年以上的随访表明组织工程化下鼻甲骨稳定存在，无明显骨吸收现象，临床治疗效果稳定。上海第二医科大学硕士学位毕业论文⑨【结论】1．通过密度梯度离心法可分离获得纯度较高的MSCs；经体外培养能保持多项分化潜能。2．人MSCs体外经条件培养液诱导培养三代后仍可表达成骨细胞表型，可以满足骨组织工程临床应用对种子细胞质和量的需要。3．采用自体MSC

7、s和pDBM在人体内可构建下鼻甲骨。4．术后1年以上随访表明组织工程化骨稳定存在，无骨吸收现象，临床治疗效果稳定。5．组织工程技术可作为目前治疗萎缩性鼻炎的最佳选择，值得推广应用。【关键词】萎缩性鼻炎组织工程治疗骨髓基质干细胞绿色荧光蛋白脱钙骨4燮型幽坐坐苎雯ClinicalStudyofAtrophicRhinitisTreatmentwithInferiorTurbinateBoneReconstructionbyTissueEngineeringAbstractAtrophicrhinitisisacommondiseaseofOtorhin

8、olaryngology，consistingofprimaryandsecondaryconditions．Itscli