去势山羊骨质疏松与椎间盘退变的相关性研究

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1、南方医科大学2011级硕士学位论文去势山羊骨质疏松与椎间盘退变的相关-陛研究Correlationbetweenosteoporosisanddiscdegenerationinovariectomizedgoats课题来源：广东省科技计划项目(20108031500005)科技支撑项目(2010J—E021)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院刘青华徐达传人体解剖与组织胚胎学学术型博士研究生基础医学院2014年03月28日广州博士学位论文去势山羊骨质疏松与椎间盘退变的相关性研究博士研究生：刘青华指导教师：徐达传摘要骨质疏松症和椎间盘退行性变化均为中老年人常

2、见病、多发病，往往可见于同一患者，严重影响其生活质量。研究表明骨质疏松患者易合并腰椎间盘退变，尤其是绝经后妇女骨质疏松症状越严重，其椎间盘退变程度也越重。这说明二者之间存在一定的内在联系或相似的发病机制，但国内外学者在雌激素、椎间盘营养、炎性因子、基因等方面的研究对其相关性得到了截然不同的结论。本研究试图在雌性山羊身上通过去势建立骨质疏松模型和椎间盘穿刺建立退变模型，并以复合模型研究二者的病理进程及推断其相关性，同时对骨质疏松山羊的骨髓间充质干细胞在椎间盘退变中可能存在的阻逆作用进行研究，为这两类疾病防治的临床与基础研究提供实验依据和新的思路。目的：构建山羊骨质疏松动物模

3、型和椎问盘退变模型并对其进行系统全面的评价，以及探讨去势山羊骨质疏松与椎间盘退变二者的内在联系；对山羊BMSCs进行体外分离培养及生物学特性研究，并探讨骨质疏松山羊BMSCs是否存在阻逆椎间盘退变的作用。方法：18只3岁雌性山羊随机分为ABC3组，A组：假手术组，B组：行双侧卵巢切除术组(ovxI组)，C组：卵巢切除+甲强龙肌注组(ovxII组)，采用骨密度测量、Micro．CT扫描重建分析、血清钙磷及碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)检查及组织形态学观察、力学测试等方法评价山羊骨质疏松情况；将20摘要只山羊随机分成A组：以16G针刺入8只山羊L3／4椎间盘并注入生理

4、盐水0．1ml(实验组或造模组)，B组：仅暴露8只羊的L3椎体下缘(sham组)，C组(正常对照组)4只。对术前及术后1、3、6个月影像学资料、组织学及I、II型胶原免疫组化等结果进行统计学分析；采用健康雌性成年山羊24只，随机分为A组：正常对照组，B：单纯去势组，C：单纯穿刺组，D：复合组(卵巢切除+椎间盘穿刺)，对腰椎MⅪ、X线、骨密度、病理组织学及免疫组化等结果进行统计学分析；抽取山羊骨髓进行BMSCs分离培养，并进行生长曲线描绘、表面标记物及细胞周期检测、成骨细胞及成软骨细胞诱导分化；选用成年山羊15只，随机分为A组：对照组3只和B组：实验组12只，对照组共显露山

5、羊L2／3、L3／4，L4／5、L5／6四个椎间盘，实验组每只山羊显露L2／3、L3／4，L4／5共计36个椎间盘的同时行椎间盘穿刺+髓核抽吸，穿刺椎间盘随机纳入3组，其中Bl组：单纯造模组、B2组：单纯海藻酸钠凝胶移植组、B3组：骨髓间充质干细胞+藻酸盐凝胶复合移植组，术后进行MⅪ扫描、DR检查及病理组织学、免疫组化染色观察分析。结果：构建骨质疏松模型各检测结果显示：1．骨密度检测：c组术后6个月腰椎BMD、BMC较术前有统计学差异(分别为t=7．756，P<0．001和t=5．194，PO．003)，分别下降26．91％和22．95％：并且与A组和B组相比均有显著性降

6、低(P<0．05)，均值低于A、B两组；B组术后6、12个月的腰椎BMD、BMC均较术前和假手术组(Sham组)有显著性降低(P0．05)。2．Micro—CT检测：Tb．N、Tb．Sp、TBPf、BV／TV、BS／BV、SMI整体比较有统计学差异(P<0．001)；OVXI组、II组的Tb．N、Tb．Sp、TBPf、BV／l'V、BS／BV、SMI与Sham组比较，均有统计学差异(P<0．05)，而Tb．Th、DA无显著差异(P>o．0

7、5)。OVXI、II两组间差异无统计学意义(P>0．05)。B组12个月及C组术后6个月的腰椎骨小梁较Sham组明显稀疏，骨小梁变细、发生断裂，孔隙率增加，局部有较大的空隙形成，皮质骨变薄。3．血清学检查：I、II组Ca、P、ALP、BGP博士学位论文含量较sham组各时间点差异有统计学意义俨0．05)。术后6个月Bc组间差