提高鸡繁殖力的抑制素制剂研制及应用效果研究

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1、浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得滥望盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：j例签字日期：、≯l丫年≥月1沪学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权迸鎏盘堂可以将学

2、位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：稀利签字日期：2。l忙)月必日III导师签名：签字日期：月必日⑧浙江大学2014届硕士学位论文人工结肠液10l7．85．0h6．Oh1．3．5三维显微镜拍摄酸化剂立体结构用三维数码显微镜观察样品中各酸(苹果酸、延胡索酸、柠檬酸)、scA和OCA并拍摄照片。(注：乳酸为液体，不能观察)2结果与分析2．1溶出度计算方法采用标准曲线法计算溶出度。试样中被测物含量计算娥X-等署x：试样中被测物的合量，mg瓜g；A1：样品

3、被测物的峰面积；A2：被测物标准品峰面积；c2：标准工作液中被测物的浓度，p∥n1L；M1：取样量，g；V：样品的定容体积，Ⅱ儿。2．2缓释复合酸化剂与普通复合酸化剂溶出度结果从表2．2和表2—3可看出：(1)三种pH下，ocA在胃中基本全部溶解，且溶出度随着pH的升高而升高；pH-3、pH．=4和pH=5时，scA在胃中的溶出度分别约为71％、72％和73％，其溶出度也是随着pH升高而升高。(2)三种pH下，ocA的溶出度差异基本不显著(P>o．05)，只在lh时p肛3和pH-5间有显著差异(P

4、．5h、3h、5h和6h的溶出度均显著低于pH=5时的(P

5、减少对FSH的抑制作用，从而促进卵泡发育，来增加排卵率。本论文选择对动物繁殖性能具有抑制作用的抑制素a亚基为研究对象，以霍乱毒素B亚基(choleratoXinBsub眦it，cTB)为基因佐剂来增强其免疫原性，构建CTB—111}1ibinQ(简称CTB．INHA)嵌合基因，并在大肠杆菌中进行融合表达，并用表达出的CTB．INHA融合蛋白作为疫苗滴鼻免疫萧山鸡，ELISA法检测鸡血清中抑制素抗体的水平，并统计分析免疫组与对照组鸡产蛋率的差异，检测CTB．INHA基因工程制剂的作用效果。结果显示，我们成功得到了鸡抑制素a亚基成熟区片段和CTB—IⅫ{A嵌合基因，并在

6、大肠杆菌中成功表达出了CTB．INHA融合蛋白，并将表达的蛋白进行纯化，Westem-bIot验证确为目的蛋白。用该融合蛋白免疫萧山鸡后，免疫鸡血清中明显产生了抗InllibinQ亚基的抗体，且持续时间较长。抗体的产生有效削弱了内源抑制素对鸡繁殖性能的抑制作用，免疫组鸡的繁殖性能均优于对照组。1～10月产蛋量提高9．91％，料蛋比降低7．69％，平均产蛋率提高8．71％。这些结果表明，本论文所研制的鸡抑制素融合蛋白(CTB．INHA)制剂能有效刺激鸡产生抗抑制素值亚基的抗体，减弱体内抑制素对鸡繁殖性能的抑制作用，提高了鸡的产蛋率。结论：采用主动免疫手段阻断对鸡繁殖性

7、能起抑制作用的抑制素是一种提高鸡繁殖性能的有效途径。关键词：抑制素，霍乱毒素B亚基(C113)，黏膜免疫，产蛋率，鸡浙江大学硕士毕业论文刚舌致谢首先感谢我的导师牛冬副教授，她无论是在科研上、学业上，还是生活上都给予了我莫大的帮助。在此，谨向我的导师表达我最真挚的谢意!我要特别感谢吴兵兵师兄，在实验的设计、方法的选取上都凝聚着他的心血。感谢他对我在实验过程中的耐心指导，并且不厌其烦地为我答疑解惑，在论文的撰写过程中也给了我很多宝贵意见，没有他的帮助，本实验就不可能如此顺利完成。我要感谢我们实验室的的同学们——袁陶燕、何俊、刘贺山、赖淑静、王晓玲，在科研的初期，正是