重金属cd纳米抗体的制备及其免疫学检测方法的建立与应用

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1、ShanghaiNormalUniVersityMasterDissertationDeVelopmentandApplicationofanImmunoassayforDetectionofCdBasedonSpecificNanobodyAgainstCd—ChelateDep扒mentSpecialt)，Life锄dEnvimnmentScienceCollegeMicrobiologyResearchDirectionMicrobiology&FoodNameJiangR础嘴nSupervisorZhouXiaoliCompleteDataMarch2014上海师范大学硕士学位论

2、文摘要㈣随着全球工业的迅速发展，我国乃至全世界日益严重的重金属污染现状，已经引起了世界各国科学家的高度重视，对于这个问题的解决已迫在眉睫。目前重金属的检测方法：微谱分析(MS)、紫外可见分光光度法(UV)、原子吸收法(AAS)、原子荧光法(AFS)、x荧光光谱(xRF)、电感耦合等离子质谱法(IcP—MS)等，虽然这些方法具有灵敏度高、特异性好等特点，但所需设备较为昂贵，需要专业技术人员进行操作，样品前处理过程复杂，检测费力费时且成本高。基于这些方面的考虑，一种简便、快速、特异和灵敏的检测方法的建立己然成为一研究热点。而免疫学检测方法为重金属检测提供了一种新的策略和途径，该方法是一种具有

3、高度特异性和灵敏度的分析方法，而且操作简单、价格低廉、检测时间短(约3～5min)，适于大规模的现场筛选。目前，国内外对于重金属的免疫检测主要集中在镉(Cd)、铅(Pb)、汞(Hg)、铬(Cr)等毒性较大的重金属，本课题以重金属镉(Cd)为研究对象，利用噬菌体一纳米抗体展示技术成功获得了一种新型的特异性针对cd．DTPA的非传统型单克隆抗体一一纳米抗体Ⅲb)，初步建立了间接竞争性ELIsA免疫检测法，并用于水样重金属镉离子的检测。本研究利用双功能螯合剂p．SCN—Bn．DTPA成功制备了重金属Cd的完全抗原Cd—DTPA—BS～0VA，并利用制备的完全抗原结合噬菌体展示技术成功筛选到了特

4、异性识别Cd．DTPA的噬菌体抗体Cd．D7rPA．VHH4．18和Cd．DTPA-VHH6—15，其中cd．DTPA．VHH4—18效果最好，亲和常数为5．95×108L／mol；与载体蛋白BS～OVA及无金属抗原DTPA—BSA／oVA均无交叉反应，与其他金属离子几乎没有交叉反应，特异性强。利用制备的cd—DTPA噬菌体抗体初步建立的间接竞争性ELIsA免疫检测法，检测限达到20ng／L，水样加强回收实验平均回收率达90％以上，达到国III类水检测标准。本课题成功的将重金属免疫检测与噬菌体展示技术结合在一起，为之后的重金属免疫检测奠定了基础。关键词：重金属cd；纳米抗体；噬菌体展示：

5、间接竞争性ELIsA；应用人BSTRACT卜海师范大学硕士学位论文ABSTRACTWiththerapiddeVelopmemofglobalindustIy，thepresentsituationofheaVymetalspollutionofourcountryaJldeVentheworldbecomesmoreandmoreserious，thishasarousedthegreata吐entionofscientistsaroundtheworld，theproblemisimminent．CurrentanalyticalmethodsfordetectionofheaVym

6、etalsincludemicr0-spectralanalysis(MS)，ultmVioletVisiblespectrophotome仃y(UV)，atomicsbso叩tionspectrometry(AAS)，atomicnuorescencespectrometry(AFS)，Xnuorescencespectroscopy(XRF)，andinductiVeIycoupledplasmamassspectrometry(ICP-MS)，etc．whicharesensitiVea11dreliable．HoweVer，thesemetllodsareexpensiVeand

7、requirehighlyspecializedappamtusajldtrainedoperators，time—consumingandcostlytodetect，whichma：kesthemunsuitdbleforonsite(1etection．BasedontheSeconsiderations，thebuildofasimple，r印id，specificandsensitiVedetectionmethodhas