不同方法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞的比较

《不同方法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞的比较》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据论文题目：丕回左法愿岱培差4∑鼠脏微血耸凼皮细胞的出较答辩委员会主席：周建墓逝江太堂医堂院附属箍二医院答辩委员会成员：陈坐贤温州医科太堂附属筮二医院金面茎温州医科太堂万方数据目录㈣必一、英文缩略词中英文对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·2二、论文摘要中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·．5三、论文正文前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··15分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21结论⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．·24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28六、综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。29七、学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38万方数据英文缩略词表AbbreviationIndex英文缩写英文全称中文译名ALI／ARDSdfDM匣MDMSOECGSECMECSFBS岫M盯TP／sPBSP^n砸Cs甲mSPSSacutelungInjury／acuterespiratoryd

3、istresssyndromedegreeoffreedomdulbecco’Smodifiedeaglemediumdimethylsulfoxideendothelialcellgrowthsupplementendothelialeellmediumendothelialcells凳talbovineserumimmunomagneticbeadmethylthiazolyltelrazoliumpenicillin／streptomycinphosphatebuffersolutionpulmonarymicrovascularendot

4、helialcellsrevolutionsperminutestatisticpackageforsocialscience急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合症自由度DMEM培养基二甲基亚砜内皮细胞生长添加物内皮细胞培养基内皮细胞胎牛血清免疫磁珠四唑盐青霉素／链霉素磷酸盐缓冲液肺微血管内皮细胞每分钟转数统计分析软件里至坚∑箜呈竺!竺皇堂竺!垒塑!垒!鲤兰生鱼里塑!垒笪堕鏖生篓里王注：按字母表先后顺序捧列2万方数据不同方法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞的比较中文摘要目的通过比较酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法三种方法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞(PM

5、VECS)的差异，探讨一种高效、稳定的小鼠PMVECs原代培养方法。方法选取45只l周龄Balb／cdx鼠，随机分成3组，酶消化法组、组织贴块法组、免疫磁珠分选法组各15只。麻醉消毒后无菌条件下剪取小鼠心肺组织置超净台内。分别采用酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法三种方法分离培养小鼠PMVECs，观察细胞形态学以及VIII因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞，计算个方法原代培养成功率及从原代培养开始到首次传代所需时间，测定细胞纯度，MTr法绘制生长曲线及计算传代次数。采用SPSS软件数据进行分析。结果当口术酶消化法获得的细胞显微镜下可见圆形、短

6、梭形、多边形等内皮细胞生长，也存在较多圆形贴壁不良细胞，细胞量多，生长快，原代培养3天后即长满培养瓶底，首次消化传代后细胞活性明显降低，细胞形态改变，体积增大，杂细胞增多，可见较多圆形死细胞及长梭形细胞，细胞纯度低，培养成功率低。组织贴块法在培养24h后PMVECs开始游出，60h后游出的内皮细胞及红细胞围绕组织块周围，多呈短梭形、多边形、融合的单胞层具有血管内皮细胞典型的铺路石样形态，纯度高，杂细胞少，但是生长缓慢，细胞数量少，分布不均匀，生长周期长，成功率低，难以用于后续实验。免疫磁珠分选法原代培养2d后可见免疫磁珠附着在细胞表面，经换液后大

7、多磁珠可以从细胞表面脱落，融合成单层的细胞呈典型铺路石样排列，细胞纯度高，无混杂细胞生长，过度生长时细胞呈纺锤状，传代后细胞增殖活跃，3．5d可再次传代，残留细胞表面的磁珠经传代后可从细胞表面脱落，5代内细胞形态较稳定，且数量多、生长快，可用于实验研究。VIII因子相关抗原免疫荧光染色细胞呈绿色荧光，证实所培养细胞为内皮细胞。万方数据原代培养小鼠PMVECs成功率比较：免疫磁珠分选法组较其他两种方法显著升高(P<0．01)，组织贴块法组较酶消化法组升高(P<0．01)。原代培养至首次传代所需时间的比较：酶消化法组较其他两种方法减少(P<0．05)

8、，免疫磁珠分选法组较组织贴块法组降低(P<0．05)。培养小鼠PMVECs第2代纯度的比较：免疫磁珠分选法组纯度较酶消化法组显著升高(P