hspa12b对内毒素刺激的小鼠肺微血管内皮细胞的作用及其机制

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1、HSPAl2B对内毒素刺激的鼠肺微血管内皮细胞的作用及其机制入到细胞内。2．RT-PCR和WesternBlot检测到mPMVECs中HSPAl2B表达下调。结论成功构建HSPAl2B表达下调的mPMVECs。关键词HSPAl2B，mPMVEC，敲除，绿色荧光蛋白第三部分HSPAl2B表达下调后LPS对mPMVECs的迁移功能、炎症反应以及凋亡的影响目的探讨HSPAl2B对LPS刺激的mPMVECs迁移功能、炎症反应和凋亡情况的影响。方法根据以下情况将mPMVECs分为四组：①空白组、@LPS刺激组、③LPS+HSPAl2BsiRNA组、@LPS+空白siRNA组

2、，分别置于370C5％C02潮湿孵箱内培养，用LPS与细胞共培养24h，取出细胞后用RT-PCR检测IL．6、IL．16、IL．10和TNF．仅mRNA表达情况，使用划痕实验和transwell小室检测细胞迁移情况，用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果RT-PCR检测结果表明：mPMVECs经LPS刺激24h后，与平行对照组(LPS+空白siI斟A组)相比，HSPAl2B表达下调组IL．6和TNF．amRNA表达水平显著上升，而IL．10则表达下降，且均有统计学意义(P<0．05)。迁移实验表明：与平行对照组对比，HSPAl2B表达下调组的mPMVECs的迁移功能明

3、显减弱；凋亡实验表明：与平行对照组相比，HSPAl2B表达下调组LPS刺激后mPMVECs凋亡明显增多。结论LPS刺激的HSPAl2B表达下调的mPMVECs迁移功能减弱、炎症反应增强、g--军医大学硕士学位论文凋亡明显。说明HSPAl2B可能内毒素刺激的鼠肺微血管内皮细胞的具有一定的保护作用。关键词热休克蛋白A12B，肺微血管内皮细胞，内毒素第四部分HSPAl2B对LPS诱导的mPMVECs中MAPK信号通路中p38的作用目的研究HSPAl2B对LPS诱导的mPMVECs中MAPK信号通路中p38的作用，初步探讨HSPAl2B保护鼠肺微血管内皮细胞的可能机制。方

4、法实验先分两组：转染空白siRNA组和转染HSPAl2BsiRNA组，观察LPS刺激24小时后，内皮细胞磷酸化p38(p-p38)、总p38(totalp38)和13-actin蛋白表达水平；用Westernblot法检测p38表达变化情况。再将实验分成4组(DLPS组、(g)LPS+siRNA组、③LPS+siRNA+p38MAPK抑制剂(SB203580)组和④LPS+siRNA+等剂量SB203580溶剂DMSO组，观察mPMVECs迁移功能、凋亡和炎症因子表达情况。最后LPS刺激mPMVECs24h后，用免疫荧光双标和免疫共沉淀方法观察HSPAl2B和p3

5、8MAPK蛋白间的相互作用。结果Westernblot分析法检测各组P．p38、totalp38和13-actin，发现HSPAl2B干扰组p-p38显著增强，p-p38和totalp38灰度值之比明显增大，且有统计学意义(尸<0．05)。SB203580可明显逆转HSPAl2B表达下调所致的mPMVECs迁移功能抑制、凋亡增加和炎症因子分泌改变。免疫荧光双标和免疫共沉淀实验证实HSPAl2B与p38MAPK信号通路中p38蛋白相互作用。结论HSPAl2B表达下调的mPMVECs中p38磷酸化显著增强，而LPS刺激的HSPAl2B表达下调的mPMVECs迁移功能减

6、弱、炎症反应增强、凋亡明显，且SB203580可逆转这些变化，免疫荧光双标和免疫共沉淀实验进一步说明HSPAl2BHSPAl2B对内毒素刺激的鼠肺微血管内皮细胞的作用及其机制可能通过降低p38磷酸化水平来抑制LPS对内皮细胞的损伤，从而对LPS诱导的内皮细胞发挥保护作用。关键词HSPAl2B，LPS损伤，磷酸化p38，p38MAPK信号通路第二军医大学硕士学位论文AbstractBackgroundandresearchstrategyLungisoneofthemostvulnerableorgansinsepsis．Acutelunginjury(～LI)al

7、waysOccursatearlystagesofsepsiswithhi：ghincidencewhichisveryhotinsepsisresearch．Lipopolysaccharide-inducedpulmonarymicrovascularendotheliacells(PMVECs)injurydirectlyleadstobarrierdysfunction．PMVECsisoneofthekeycellswhichaccompany、)~，inlthecauseanddevelopmentofendotoxin—inducedacutelun

8、ginju