上调mir-429表达对食管癌细胞凋亡和侵袭的作用

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1、万方数据AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMastermiR·-429up-·regulationinducescellapoptosisandsuppressesinvasionbytargetingBcl··2andSP--1inesophagealcarcinomaByYuanyuanWangSupervisor：GuoqiangZhaoMicrobiologyandImmunologyBasicMedicalCollegeofZ

2、hengzhouUniversityMarch2014万方数据原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者国瞧愎吼叫午年占月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国

3、家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文．本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时．第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者倔瞧救吼卅恬舌月日万方数据郑州大学2014届硕士学位论文中文摘要上调miR-429表达对食管癌细胞凋亡和侵袭的作用硕士研究生：王媛媛导师：赵国强郑州大学基础医学院微生物学与免疫

4、学教研室郑州450001摘要背景与目的食管癌是全球最常见的六大恶性肿瘤之一。在我国食管癌的死亡率居恶性肿瘤的第四位(17．38／105)。食管癌早期可无症状或仅有轻微症状，发展到中晚期出现进行性吞咽困难后才能得以临床诊断，失去了治疗的最好时机。在已经对后基因组计划进行研究的今天，从基因水平上筛检食管癌高危易感人群、探究其病因及治疗方案就显得尤为重要。mieroRNAs(miRNAs)是一类约18-25个核苷酸(nt)长的单链RNA分子。它们可以控制多种基因的表达，介导肿瘤的发生过程，从而发挥癌基因或抑癌

5、基因的作用。为探究miRNA在食管癌中的表达情况，本实验室对食管癌组织及其癌旁组织做了基因芯片分析，发现食管癌组织中miR一429的表达水平明显低于癌旁组织。本研究旨在了解miR．429在食管癌及癌旁组织中的表达情况，探讨其与食管癌患者病理特征的关系；揭示上调miR一429后其对食管癌细胞凋亡及侵袭的影响；初步探索miR．429的生物靶标及其调控机制。方法1．于2011年6月至2012年5月问在郑州大学第一附属医院收集T32ffO食管癌患者的食管癌组织及其癌旁组织，一80。C保存。采mqRT-PCR方法

6、检测32例食管癌组织及其癌旁组织的miR．429及Bcl．2和SPI基因的mRNA表达水平，通过万方数据郑州大学2014届硕士学位论文中文摘要Westernblot实验检测标本中Bcl一2和SPl蛋白的表达水平，分析其表达水平与患者病理临床资料的关系。2．合成miR一429agomir和miR一429negativecontrol，并将其用脂质体转入食管癌细胞EC9706和KYSE30中。根据转染物质的不同将细胞分成三组：miR-429组，转染miR一429agomir；NC组，转染miR一429neg

7、ativecontrol；Blallk组，仅加转染试剂脂质体。转染后的细胞置于二氧化碳培养箱继续培养，用于后续实验。3．对三组食管癌细胞进行CCK．8生长实验，观察miR．429对食管癌细胞增殖的影响。4．对三组食管癌细胞进行流式细胞术和Caspase酶活性实验，观察miR一429对细胞凋亡的影响。5．对三组食管癌细胞进行Transwell实验，观察miR一429对细胞侵袭能力的影响。6．采用1’argetScan和miRallda生物信息学分析软件预测miR-429的作用靶标。构建Bcl一2／SPl3

8、’UTR区的野生型及突变型重组报告基因载体，分别将其与miR一429agomir或者miR-429negativecontrol共转染入食管癌细胞EC9706和KYSE30中，通过Westernblot和双荧光素酶报告实验证实miR一429的作用靶标。7．构建无3’UTR区Bcl一2／SPl的表达载体，单独转入或与miR．429agomir共转染入食管癌细胞EC9706和KYSE30中，通过restore方法分析miR一429调控Bcl一2