重组pegfp-n1-cd146表达载体的构建及其对mda-mb-231细胞侵袭、凋亡的影响

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1、青岛大学硕士学位论文重组pEGFP--N1--CD146表达载体的构建及其对MDA--MB--231细胞侵袭、凋亡的影响姓名：伦明申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：高美华20120529重组pEGFP-N1一CDI46表达载体的构建及其对MDA-MB-231细胞侵袭、凋亡的影响中文摘要目的：构建人类CDl46基因的表达载体，研究其对乳腺癌细胞MDA—MB-231细胞侵袭、凋亡的影响。方法：采用分子生物学方法构建人类CDl46基因的表达载体，利用脂质体Lipofectamine2000转染到乳腺癌细胞MDA—MB-231，于荧光显微镜下评价转染效果，利用RT．PCR、Westernblo

2、t分别检测基因CDl46在mRNA、蛋白水平上的表达效果。采用MTT法检测细胞在体外增殖的能力；流式细胞仪法FCM检测细胞的周期分布及凋亡水平的变化情况；Transwell实验观察细胞侵袭能力改变。结果：酶切、测序结果均表明pEGFP-Nl-CDl46载体构建成功；RT—PCR、Westernblot结果显示，与对照组相比，转染细胞后，实验组CDl46mRNA和蛋白的水平表达均有增高(K0．05)；增殖实验结果显示转染后实验组细胞增值能力较对照组细胞增高(尸

3、细胞明显增强(P

4、anbreastcancercellMB．MDA231．MethodsAccordingtoaseriesofmolecularbiologymethods,theCD146overexpressionplasmidWasconstructed．ThevectorWastransfectedintoMB-MDA231cellsbylipofeetamine,andtheexpressionofCDl46mRNAandproteinwereanalyzedbyRT-PCRandWesternblotanalysisrespectively．ThenMTTassayswereusedtoobse

5、rvetheinhibitoryeffectofCD46oncellproliferationinvitro，andFCMwereusedtodetectthecellcycleandapoptosis，meanwhile，theeffectOncellinvasioni11vitrowereanalysisedbyTranswelltests．ResultspEGFP-NI·CDl46plasmidWassuccessfullyconstructedandidentifiedbyeI"IZyIllerestrictiondigestionandsequenceanalysis．Compar

6、edwithcontrolgroups，theexpressionofCDl46mRNAandproteinlevelweresignificantlyincreased(P<0．05)．InMB—MDA231transfeetedbypEGFP-N1-CDl46plasmids，Thegrowthabilityofceilsinexperimentalgroupwcl'ehigherthanthatofcontrolgroups(P<0．05)．Comparedwithcontrolgroups，andtherateofapoptosiswasdecreasedremarkably(P

7、．05)．Theabilitiesofinvasionwcreincreased(尸