论文资料-绿豆降血压肽的分离纯化(刘祎炜)

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2、袁艿蒇葿肆膅蒆薂衿肁蒅螄肄肇蒄袆羇莆蒃薆螀节蒂蚈羅膈蒂螁螈肄薁蒀羄羀薀薃螇芈蕿蚅羂膄薈袇螅膀薇薇肀肆薆虿袃莅薆螁聿芁薅袄袁膇蚄薃肇肃芀蚆袀罿芀螈肅芈艿薈袈芄芈蚀膄膀芇螂羆肆芆袅蝿莄芅薄羅芀芄蚇螇膆莄蝿羃肂莃葿螆羈莂蚁羁莇莁螃袄芃莀袅聿腿荿薅袂肅莈蚇肈羁莈螀袁艿蒇葿肆膅蒆薂衿肁蒅螄肄肇蒄袆羇莆蒃薆螀节蒂蚈羅膈蒂螁螈肄薁蒀羄羀薀薃螇芈蕿蚅羂膄薈袇螅膀薇薇肀肆薆虿袃莅薆螁聿芁薅袄袁膇蚄薃肇肃芀蚆袀罿芀螈肅芈艿薈袈芄芈蚀膄膀芇螂羆肆芆袅蝿莄芅薄羅芀芄蚇螇膆莄蝿羃肂莃葿螆羈莂蚁羁莇莁螃袄芃莀袅绿豆降血压肽的分离纯化

3、08食品科学与工程1班刘祎炜由高蛋白植物——绿豆中提取的蛋白经蛋白酶等酶分解后，除去未反应的蛋白质，然后分离纯化制得降血压肽。降血压肽（antihypertensivepeptide，AHP）是一类能够降低人体血压的小分子多肽。它的生理功能是抑制血管紧张素转换酶（ACE）的活性，从而达到降低血压的作用。其作用是阻断血管紧张素Ⅰ向血管紧张素Ⅱ转化，从而阻断血压上升。降血压肽来源于天然动、植物及微生物，具有降血压效果明显、无毒副作用等优点。血管紧张素转化酶(ACE)是由动物肺血管内皮细胞分泌的，与调节末梢血压

4、的凝乳酶血管紧张素系统有关，在血压调节中起着关键性的作用，通过抑制体内ACE活性来治疗高血压是一条非常重要的途径。在许多植物蛋白中，存在着一些特殊的短肽（C3～C12），经蛋白质分解酶的作用而产生，它们都具有一定的抑制血管紧张素转化酶的活性，从而抑制高血压的发生。这种作用仅发生在血压偏高的动物身上，对血压正常者无效，也无副作用。其中来源于豆类蛋白的降血压肽，因其无毒、无副作用，显示出良好的应用前景，已成为当前研究的热点。ACE抑制肽为血管紧张素转换酶抑制肽，能抑制血管紧张素转换酶的活性。增强机体对各种疾病

5、的防御力，维持自身的生理平衡。绿豆降血压肽的制备绿豆降血压肽制备方法主要是蛋白酶水解法。它从作用的方式上可分为直接酶解和微生物发酵法。利用直接酶解法生产绿豆降血压肽，又分为单酶水解法和复合酶水解法。以绿豆分离蛋白为原料，选用4种商业蛋白酶进行单酶水解并比较水解产物对ACE的抑制效果，最终得到中性蛋白酶水解产物对ACE的抑制效果最强，在pH值为8．0，温度为45℃，酶与底物浓度比6％，水解时间480min时，水解度达到52％，得到的ACE抑制肽活性最强。用胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白

6、酶分别对绿豆4分离蛋白进行酶解，并分析水解度的高低、分子量的大小与降压效果的关系。结果表明，碱性蛋白酶的最大水解度可达到21％，依次为胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，最低为胰蛋白酶仅为9％左右，与此对应的碱性蛋白酶的酶解物的ACE活性抑制率为最高(44．9％)，胃蛋白酶次之(43．5％)；分子量范围在1000Da以下组分对ACE的抑制效果最高，碱性蛋白酶作用获得的小分子肽组成为71．25％，胃蛋白酶的为69．35％，但其对应的ACE抑制率却为64．57％和78．49％。中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶作

7、用获得的小分子肽的ACE抑制率分别为45．7％、47．3％和29．6％。由此可见，水解度越高、分子量越低的绿豆肽降压效果越好。而单酶水解法存在水解度较低、低分子量肽得率低等缺点，而复合酶法可以克服单酶法的这些不足，除少数双酶酶解所得的绿豆降血压肽活性较高外，其他双酶法的作用效果与单酶法相比，并没有明显优势。这说明酶作用于底物的机制是一种非常复杂的现象。在绿豆降血压肽制备的研究中，与直接酶解法不同，因微生物发酵机理较复杂，进程不易控制，目前较少应用。与直接酶解法生产绿豆多肽相比，发酵法利用豆粕作为发酵底物，

8、使得原料成本低廉、工艺过程简便、条件温和，得率提高10％～20％，成本却仅为酶解法的50％~60％。绿豆降血压肽的分离纯化目前常用的分离纯化方法为：先用活性炭吸附除去较高分子量、未水解的绿豆蛋白质及色素等物质，然后用超滤除去不溶底物、分子量较大的绿豆蛋白质和肽类，获得所需要的降血压肽，再用凝胶过滤层析柱将混合物通过多孔的凝胶床而达到分离目的。由于许多肽结构很接近，根据具体情况可以再结合离子交换色谱，通过电荷的差异，达到更好的分