降胆固醇黑豆肽的分离纯化与结构鉴定-论文.pdf

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1、1282013，VoL34,No．19食品科学※基础研究降胆固醇黑豆肽的分离纯化与结构鉴定刘恩岐，李华，巫永华，高兆建，张建萍(1．西北农林科技大学葡萄酒学院，陕西杨凌712100；2．徐州工程学院江苏省食品资源开发与质量安全重点建设实验室，江苏徐州221008)摘要：通过超滤与大孔树脂吸附分离黑豆蛋白酶解产物，获得降胆固醇活性较强的黑豆肽组分，采用凝胶过滤色谱(GFC)、反相高效液相色谱(RP．HPLC)与排阻色谱(SEC)对黑豆肽粗品进行纯化，得到高纯度的降胆固醇肽，经Edmanl~、N端测序对降胆固醇黑豆肽一级结构进行分析鉴定，其氨基酸

2、组成序列为Ala．Phe．Pro—Lys—Asp，相对分子质量为576，肽链中具有特定的疏水区域，且Pro位于N端之外的重要位点。关键词：黑豆肽；降胆固醇；分离；结构鉴定IsolationandIdentificationofHypocholesterolemicPeptideDerivedfromBlackSoybeanProteinLIUEn．qi。，LIHua，WUYong—hua，GAOZhao-jian，ZHANGJian．ping(1．CollegeofEnology，NorthwestA&FUniversity，Yangling

3、712100，China；2．JiangsuKeyLaboratoryofFoodResourceDevelopmentandQualitySafety，XuzhouInstituteofTechnology，Xuzhou221008，China)Abstract：Blacksoybeanpeptides(BSPs)withstronghypocholesterolemicactivitywerepurifiedfromblacksoybeanproteinhydrolysatesbyusingultrafiltration(UF)andma

4、croporousadsorptionresin(MAR)，andfurtherpurifiedusingSephadexG一25column，reversedphasehigh-performanceliquidchromatography(RP-HPLC)andsizeexclusionchromatography(SEC)．TheaminoacidsequenceofthepeptidewiththestrongesthypocholesterolemicactivitywasconfirmedasAla—Phe—Pro—Lys—Asp

5、byautomatedEdmandegradationinaproteinsequencer，anditsrelativemolecularmasswasdeterminedtobe576D．Inaddition，aspecifichydrophobicdomaininthesequencewasobserved，andProwaslocatedinanimportantregionexcepttheN·terminus．Keywords：blacksoybeanpeptides；hypocholesterolemicactivity；iso

6、lation；structuralanalysis中图分类号：TS201．2．1文献标志码：A文章编号：1002—6630(2013)19．0128．05doi：10．7506／spkx1002—6630—201319028国内外研究发现，通过对蛋白质适当酶解可以得到其结构与功效之间的关系具有重要意义¨。目前对具有具有各种生物活性的功能肽Ⅲ，且疏水性氨基酸对蛋白肽降胆固醇作用的小分子肽报道较少，Makino等u研究发的降胆固醇、抗氧化等生物活性有较大贡献口】，其中研现，大豆蛋白肽中的疏水性氨基酸可促进胆固醇的胆汁究报道最多的是大豆蛋白肽_61

7、，已成为功能性食品及肽酸化，因此起到降低血液胆固醇的作用。YoshikawaI】、类药物开发研究中的新热点。据相关文献[7—8]报道和本Pak【1等研究发现，降胆固醇肽一般具有特定的疏水区实验前期测定分析，黑豆蛋白与普通大豆蛋白的氨基酸域，疏水性序列的长度为4个氨基酸，脯氨酸Pro残基是组成基本一致，且黑豆蛋白质含量、总必需氨基酸和疏其中一种关键组成，可位于肽链除N端外的任何区域。水性氨基酸含量均明显高于普通大豆蛋白，具有营养价本实验采用Alcalase碱性蛋白酶、Neutrase中性蛋白值与生物活性肽类产品开发优势。酶~IFlavourzy

8、me风味蛋白酶对黑豆蛋白进行组合水解，胆固醇是一种水不溶性颗粒，它在肠道内的吸收与以胆固醇胶束溶解度抑制率为测定评价指标，通过超滤其他脂质很相似，都要进行胶束溶解作