霍山石斛多糖的分离纯化与结构鉴定

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1、霍山石斛多糖的分离纯化及结构鉴定摘要霍山石斛属于兰科，多年生草本植物，主要分布于中国安徽省霍山县，是我国最早有记载的石斛类中药材，具有巨大的药用价值和市场潜力。多糖是霍山石斛中最主要的活性成分之一，研究发现霍山石斛多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗白内障以及提高机体免疫力等作用。本文以霍山石斛为材料，成功分离纯化了一种多糖DHP-W2，对它的结构进行了详细的解析，并对DHP-W2的抗糖基化活性进行了初步的研究。通过不同浓度TCA对多糖脱蛋白率和多糖损失率关系的比较，发现0.5%TCA脱蛋白效果较好且多糖损失率较低，因此采用0.5%TCA对经热水浸提得到的霍山石斛粗多糖进行脱蛋白。霍山石

2、斛粗多糖经DEAE-纤维素离子交换树脂，SephacrylS-200 分离纯化得到一单一组分DHP-W2。经高液相凝胶渗透色谱测定其分子 量为7.3×104Da。红外光谱扫描分析表明它是典型的多糖类化合物,紫外光谱分析表明其不含蛋白质、核酸等杂质，全水解分析表明DHP-W2主要由葡萄糖（Glc）、木糖（Xyl）和半乳糖（Gal）按1.1:1.0:0.5的分子摩尔比以及少量的半乳糖醛酸组成。甲基化分析和核磁共振 波谱分析表明，DHP-W2的主链由1，6-连接和1，4-连接的β-D-glucose 组成，分枝点位于O-4/6；DHP-W2的枝链由1，4-连接的α-D-xylose、

3、 1,2,4-连结的α-D-xylose以及末端残基α-D-xylose、α-D-galactose和 α-D-galacturonicacid组成。对DHP-W2的体外抗蛋白质非酶糖基化活 性进行了初步的研究表明DHP-W2具有明显的体外抗蛋白质非酶糖基化活性。关键词：霍山石斛；多糖；结构；抗糖基化活性Purificationandidentificationof polysaccharidesisolatedfromDendrobium huoshanenseABSTRACTDendrobiumhuoshanenseC.Z.TangetS.J.Cheng(Orchidace

4、ous)is aperennialherbalplantandmainlydistributeinHuoshancounty,Anhui provinceofChina.D.huoshanenseisoneoftheearliestrecorded medicinalplantsinChina,andpossessesprominentmedicinalvalueand enormousmarketdemand.Recentresearchindicatesthatpolysaccharides areoneofmajoractiveingredientsofD.huoshan

5、enseandpossessesa varietyofbioactivities,includingantioxidation,antitumour,immunity improvementandanticataract.Inthispaper,DHP-W2wassuccessfully isolatedfromD.huoshanense,anditsstructurefeaturesandanti-glycated activitywereinvestigatedrespectively.Comparisonbetweenremovalrateofproteinandloss

6、rateof polysaccharideindifferentconcentrationsofTCAindicatedthat1.5% TCAwasmostappropriatelyusedtoremoveprotein.ThecrudepolysaccharideofD.huoshanensewasfractionatedby DEAE-celluloseanion-exchangeandgelfiltrationchromatographyof SephacrylS-200,givingonepurefractionDHP-W2.Itsmolecularweight wa

7、sdeterminedtobe7.3×104byhigh-performancegel-permeation chromatography.TheinfraredspectraanalysisrevealedthatDHP-W2was atypicalpolysaccharideandtheultravioletanalysisindicatedthat DHP-W2didnotcontainproteinsandnucleicacids.DHP-W2was composedofglucos