超声预处理酶膜耦合反应制备鱼鳞胶原蛋白肽的技术研究

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1、超声预处理酶膜耦合反应制备鱼鳞胶原蛋白肽的技术研究ThePreparationoffishCollagenPeptidebyUltrasonicPretreatedandEnzymeMembraneCoupfingReaction专业名称姓2014年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识

2、到本声明的法律结果Fh本人承担。学位论文作者签名：毒P锾枣7矽忖年占月)2．日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论

3、文属于不保密·r学位论文作者签名：善伊住主，矽ILr年‘月l乙日指导教师签名f白卓伽J中年多月f2，日江苏大学硕士学位论文摘要本文以罗非鱼鱼鳞为原料，主要对鱼鳞脱钙技术、聚能式超声波辅助热水提取鱼鳞胶原蛋白技术以及酶解膜分离反应制备鱼鳞降血压肽技术进行了研究，进一步对酶膜耦合过程中的梯度稀释补料技术进行了研究。本文具体的研究工作及结论如下：(1)对鱼鳞主要成分进行了分析，得出鱼鳞中蛋白质和灰分分别占鱼鳞重量的48．33％和34．97％，脂肪含量很少只有1．2％；鱼鳞蛋白为典型动物胶原蛋白的氨基酸组成。(2)采用盐酸对鱼鳞进行了脱钙技术研究，以脱钙率为指标，得出最佳的脱

4、钙条件为：脱钙料液比1：20、时间80min、酸浓度0．5mol／L，此条件下脱钙率可达到99．42％，脱钙后鱼鳞的灰分含量为0．32％。(3)以脱钙后的鱼鳞为原料，利用超声波辅助热水提取技术进行胶原蛋白提取试验研究，得出最佳的提取胶原蛋白条件为：提取温度80。C，液料比40mL／g、提取时间60min、pH6、脉冲超声发声时间8s与间歇时间5s，在此条件下提取率为81．25％。与传统热水提取比较，超声辅助提取的提取率增加了20．71％。通过多元线性回归拟合，得到了胶原蛋白提取率与提取液温度、液料比以及超声提取时间之间的数学模型，得出胶原蛋白提取率的模型预测值与实测值

5、之间无显著性差异。对超声处理前后的胶原蛋白进行了傅立叶变换红外光谱分析结果表明，超声处理后蛋白的酰胺I和酰胺II最大波峰发生了改变，说明超声处理前后胶原蛋白的二级结构发生了变化。(4)以提取的胶原蛋白为原料，以DH、ACE抑制率为指标，采用超声波辅助碱性蛋白酶酶解技术进行降血压活性肽制备技术研究，得到最佳工艺为：酶解时间25min，酶解温度50。C、pH8．7、加酶量0．14AU／g、底物浓度2％，在此条件下得到的多肽ACE抑制率为69。37％。通过多元线性回归拟合，得到了ACE抑制率与pH、加酶量以及底物浓度之间的数学模型，ACE抑制率的模型预测值与实测值之间无显著

6、性差异。超声辅助酶膜耦合反应制备鱼鳞胶原蛋白肽的技术研究(5)在超声辅助酶解鱼鳞胶原蛋白最佳反应条件下，利用稀释梯度补料酶膜耦合反应技术，进一步改善酶解反应效果，得出最佳的稀释梯度补料模式为每5min补一次料，每隔25min降低O．2％浓度梯度，此时单位酶产肽量为9．519肽／(AU酶)、IC50为1．06mg／mL及蛋白转化率为28％。单位酶产肽量为不补料效率的2．71倍。关键词：鱼鳞，胶原蛋白肽，酶解，超声波，酶膜耦合江苏大学硕士学位论文ABSTRACTBasedonscales，collagenpreparationinultrasonicassistedwas

7、studied．Fishscalecollagenwaspretreatedwithultrasonicandinvestigatedparametersofalkalineproteasehydrolysis．Furthermore，enzymaticandmembranereactionparametersandenzymemembranecouplingprocessdilutionfeedingtechniqueswerealsostudied．Theobtainedresultsandconclusionarelistedasfollows