e.tenella感染对鸡tlrs mrna表达水平的影响

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1、西南大学硕士学位论文E.tenella感染对鸡TLRsmRNA表达水平的影响姓名：秦波申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：聂奎20120601摘璎E．tenella感染对鸡TLRsmRNA表达水平的影响预防兽医学专业硕士研究生秦波指导教师聂奎教授摘要柔嫩艾美尔球虫(Eimeria．tenella)是鸡球虫中致病力最强的球虫。迄今，对柔嫩艾美尔球虫(E．tenella)的病原形态、生活史及流行特点方面已有较深入的研究。但由于对艾美尔球虫免疫机制、特别是固有免疫机制的研究较少，制约了球虫疫茼研发的进展。模式识别理论(patternrecognitionrec

2、eptor。PRRS)的提出，使人们扩宽了对球虫固有免疫机制的认识，Toll样受体(toll．1ikereceptors，TLRs)是固有免疫反应中重要的模式识别受体IzJ。目前，对哺乳动物TLRs的种类、配体、生物学功能有了较为全面的了解，给予研究者们对抗球虫疫苗的研制提供了新的思路。近年来，禽类TLRs的研究也有了一定进展，但主要集中在TLRs与细菌、病毒感染-力．面的研究，而在寄生虫感染对禽TLRs表达的影响方面的相关研究相对较少。本试验以固有免疫学理论为指导，以分子生物学、细胞生物学和生物信息学为研究手段，探索鸡在抗E．tenella感染中TLRs的固有

3、免疫应答作用。主要开展以下几个方面的研究：(1)检测6．2I不同日龄阶段雏鸡盲肠中TLRsmRNA的表达量：(2)通过两种剂量Etenella体内感染15日龄雏鸡，检测其盲肠组织中TLRsmRNA的表达量变化；(3)用Etenella第二代裂殖子体外刺激鸡外周血单核．巨噬细胞，检测单核．巨噬细胞中TLRsmRNA的表达量。并收集上清液检测IL．6、IL．12、IL．10及IFN吖的含量。1．6．2l不同日龄阶段雏鸡盲肠组织中TL黜mRNA的表达分别在6、9、12、15、18和21日龄时采集雏鸡盲肠组织，用SYBRGreenI荧光定量PCR法检测鸡盲肠组织中TLR

4、smRNA表达量，研究不同日龄阶段雏鸡盲肠中TLRsmRNA的表达变化情况。试验结果显示：鸡TLRs(ChTLR)在6．2l不同I=l龄雏鸡盲肠中均有表达。其中，6i=l龄时ChTLRsmRNA的表达均呈较高水’卜：9日龄时除ChTLR3外，其它各种ChTLRsmRNA的表达较6、12日龄显著下调(P<0．05)；12日龄时除ChTLR3外，其它各种ChTLIRsmRNA的农达均高于其它日龄，且ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5、ChTLR7、ChTLRl5mRNA的农达显著升高(P<0．05)；ChTLR3mRNA的表达在6、9、12日龄变化小明显(P>

5、O．05)；但在15、18、21日龄时，雏鸡盲肠中TLRsmRNA的表达均极显著低于6、12日龄(P

6、0个E．tenella卵囊／只口服接种l5日龄雏鸡，并设立不感染对照组。荧光定量PCR法检测感染后1．7天内雏鸡盲肠中TLRsmRNA的表达水平。结果发现：接种5,000卵囊／只鸡中TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLRl5及TLR21mRNA表达在第4_5天都呈显著升高(P<0．05)，且TLR4、TLR5mRNA表达在第l天极显著上调(P

7、5及TLR21mRNA表达在第2、4及5天均显著下调(P

8、3、ChTLR5、ChT