空肠弯曲菌膜融合蛋白cmea、外膜蛋白cmec的表达、纯化与结晶筛选

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1、万方数据目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。11前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。31．1空肠弯曲菌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．2病原微生物多重耐药性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。41．3空肠弯曲菌多重耐药系统CmeABC⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。72．1材料、仪器、溶液与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。72．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．2．1CmeA、CmeC蛋白表达体系的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．122．2．2CmeA、CmeC蛋白的表达和纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．2．3CmeA、CmeC蛋白的结晶⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。213结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．223．1CmeA、CmeC蛋白表达体系的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯223．2CmeA、CmeC蛋白的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2s3．3去垢剂的筛选以及CmeA、CmeC蛋白状态的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯283．4Cme

3、A、CmeC蛋白的结晶初筛与优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯334总结与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOeIODoi⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46万方数据缩略语(Abbreviation)㈣洲㈣1111111IllUIllllI．111．1IIIIY2鳗44鳆缩写英文名C12E8OctaethyleneglycolmonododecyletherDTTdithiothr

4、eitolEDTAEthylenediaminetetraaceticacidHis6SixconsecutivehistidineresiduesIPTGIsopropylbeta·-D-·thiogalactopyranosideNi-N1’ANicl(e1．nitrilotriaceticacidPCRPolymerasechainreactionPMSFPhenylmethylsulfonylfluorideSDS-PIAGESodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectrophoresis万方数据摘要空肠弯曲菌(Campylobacterje

5、junO是最常见的导致肠炎的细菌，它也可通过神经节苷脂模拟机制导致周围神经系统白免疫紊乱的格林巴利综合征，对人类健康造成危害。临床经验表明，空肠弯曲菌在人体肠道内的生存和繁殖过程中，对四环素、红霉素和氯霉素敏感，对青霉素、大灵碱、喹啉酮和头孢霉素表现出很强的耐受性。通过对其感染过程及抗性机制的了解，有针对性地设计药物与抗体，从而减少空肠弯曲菌对人类健康的危害，成为近年来的一个较重要的课题。CmeABC系统是空肠弯曲菌中的多重耐药外排系统，在对抗生素以及胆盐的抗性中起着主要作用。CmeABC系统包括三种蛋白：细胞膜融合蛋白CmeA，细胞内膜蛋白CmeB和细胞外膜蛋白CmeC。其中CmeA蛋白主

6、要功能为连接CmeB和CmeC，帮助形成外排通道。CmeC蛋白主要是作为通道，将抗生素和胆盐等从细菌体内运到体外。外源性的抗体、药物分子可以通过作用于外膜蛋白CmeC影响到CmeABC系统的功能，所以它是一个潜在的药物作用靶点。本课题对空肠弯曲菌膜融合蛋白CmeA、外膜蛋白CmeC蛋白进行表达、纯化和结晶筛选，为以后解析CmeA、CmeC蛋白的结构、针对性地设计药物、治疗相关疾病打下基础。并可借此深入理解此类蛋白的结构与功能特征，理解CmeABC系统在空肠弯曲菌生存、增殖和感染中的作用。关键词：空肠弯曲菌，抗药性，CmeA，CmeC，纯化，结晶筛选万方数据ABSTRACT(，日刀7pylob

7、acter／影材历isthemostcorfln'lonbacteriacausingenteritis．ItaIsocanleadtotheGuillain-BarresyndromeofperipheralnervoussyStemautoirnl_：nunedlsorderthroughgangliosidesimulationmechanism,andcausehumanhealthdamage．乙1