淋病奈瑟菌外膜蛋白与粘膜佐剂的融合表达

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1、·269·第10卷　第4期中　华　男　科　学Vol.10No.42004年4月NationalJournalofAndrologyApr.2004·论著·淋病奈瑟菌外膜蛋白与粘膜佐剂的融合表达潘　静,毛旭虎,张卫军,鲁东水,罗　萍,王　宁(第三军医大学医学检验系,重庆400038)摘要:　目的:在大肠埃希菌(E.coli)中表达淋病奈瑟菌外膜蛋白与粘膜免疫佐剂的融合蛋白。　方法:PCR扩增淋病奈瑟菌保守抗原表位porinloopⅥ～Ⅷ(PL678)基因,并与不耐热肠毒素B亚单位(LTB)融合,转化E.coli,ELISA、SDS2PA

2、GE及Western印迹分析其表达。　结果:融合蛋白获得表达,具有结合GM1神经节苷酯的能力和与抗淋病奈瑟菌多克隆抗体的反应性。　结论:融合蛋白的表达为研究淋病奈瑟菌分子内佐剂疫苗奠定了基础。关键词:淋病奈瑟菌;不耐热肠毒素B亚单位;融合表达+中图分类号:R339.21　　文献标识码:A　　文章编号:100923591(2004)0420269204FusionExpressionofNeisseriagonorrhoeaeOutmembraneProteinwithaMucosalAdjuvantPanJing,MaoXuhu,Zh

3、angWeijun,LuDongshui,LuoPing,WangNingCollegeofMedicalLaboratory,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China(PanJ,MaoXH,ZhangWJ,LuDS,LuoP,WangN)Correspondenceto:MaoXuhu,E2mail:clinimmu@mail.tmmu.com.cnAbstract:Objective:ToexpressafusionproteinofNeisseriagonorrho

4、eaewithamucosaladjuvant.Methods:ThegenecodingLoopⅥ2Ⅷ(PL678)ofporin,anout2membraneproteinofNeisseriagonorrhoeae,wasobtainedbyPCR.ItwasinsertedintoaplasmidfusedwithsubunitBofheatlabileenterotoxin.TherecombinantwastransformatedinE.coli.Theexpressionoffusionproteinwasanalys

5、edbyELISA,SDS2PAGEandWestern2blot.Result:FusionproteinwithLTBwassuccessfullyexpressed,anddisplayedboththeabilityofbindingGM1andthereactogenicitywithpolyclonalantibodiesagainstNeisseriagonorrhoeae.Conclusion:Theexpressionoffusionproteinlaidafoundationforthestudyoftheintr

6、amolecularvaccineagainstNeisseriagonorrhoeae.NatlJAndrol,2004,10(4):2692271,274Keywords:Neisseriagonorrhoeae;subunitBofheatlabileenterotoxin;fusionexpression　　淋病奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,Ng)是淋病的优势/显性,为研制和开发淋病分子内佐剂基因工程致病菌,疫苗对于预防控制淋病的流行传播具有十疫苗奠定基础。1分重要的意义。本研究拟应用分子设计的理论和基因重

7、组技术通过分析Ng具有保护作用的抗原表1　材料与方法位porinloopⅥ～Ⅷ(PL678)的分子结构,克隆其基因,1.1　材料E.coliDH5α、JM109菌株为本室保存菌并与强力、无毒的粘膜免疫佐剂不耐热肠毒素B亚种,LTB羧基末端融合表达载体pLV2.0由本室构单位(subunitBofheatlabileenterotoxin,LTB)按适当空间结构在大肠埃希菌(E.coli)中融合表达呈免疫建。各种限制性内切酶、TaqDNA聚合酶、T4DNA收稿日期:2003202219;修回日期:2003212210基金项目:重庆市应用

8、基础研究课题(200026321)作者简介:潘　静(19682),重庆市人,实验师,硕士研究生,从事临床检验专业。通信作者:毛旭虎,E2mail:clinimmu@mail.tmmu.com.cn·270·中　华　男　科