淋病奈瑟菌表面蛋白A克隆、表达和免疫原性鉴定

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1、淋病奈瑟菌表ifii蛋白a克隆、表达和免疫原性鉴宦［摘耍］冃的克隆并构建淋病奈瑟菌表面蛋白A(nspA)基因原核表达系统，并对重组产物rNspA进行免疫原性鉴定。方法采用PCR扩增nspA基因，构建nspA基因原核表达系统。SDS-PAGE检测目的重组蛋口rNspA表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯rNspA,免疫双扩散试验及WesternBlot鉴定rNspA的免疫原性。结果克隆的nspA基因与GenBank中相关序列相似性为100%,rNspA表达量为细菌总蛋白的40.1%,提纯的rNspA在SDS-PAGE后

2、显示为单一"的蛋口条带。rNspA抗血清免疫双扩散效价为1:4,rNspA抗血清能有效识别rNspA0结论所构建的nspA基因原核表达系统能高效表达rNspA,表达的产物有良好的免疫原性，为淋病奈瑟菌免疫疫苗的研制奠定基础。［关键词］淋病奈瑟菌:nspA基因；克隆/重组表达；免疫原性鉴定［中图分类号］R759.2［文献标识码］A［文章编号］1673-9701(2012)03-0009-02ConstructionandprokaryoticexpressionofNeisseriagonorrhocaonspAgen

3、eandimmunologicalidentificationoftheexpressedproductDUPengWUSenlinZHONGYawenSUNAihuaZhejiangMedicalCollege,Hangzhou310053,China［Abstract］ObjectiveToclonenspAgeneofN.gonorrhoeaeandthenconstructitsprokaryoticexpressionsystem,andtoidentifytheimmunogenicityofitspro

4、duct.MethodsnspAgenewasamplifiedbyPCRanditsprokaryoticexpressionsystemwasthenconstructed.SDS-PAGEwasusedtomeasuretheexpressionoftargetrecombinantproteinrNspA,Ni-NTAaffinitychromatographywasappliedtoextractrNspA.DoubleimmunodiffusionandWesternBlotassaywereapplie

5、dtoindentifyimmunogenicityofrNspA.ResultsSequencesimilarityoftheclonodnspAgenewas100%comparedtothecorrespondingsequenceinGenBank.TheexpressionoutputofrNspAwasapproximately40.1%ofthetotalbacterialproteins.TheextractedrNspAshowedasingleproteinbandingelafterSDS-PA

6、GE.TheimmunodiffusiontiterofrabbitantiserumagainstrNspAwas1:4.TherNspAantiserumwasabletorecognizerNspA.ConclusionTheconstructedprokaryoticexpressionsystemenableexpressrNspAwithhighefficicncy,andcanbeusedasacandidateantigenfordevelopinggeneticengineer!ngvaccine.

7、［Keywords］Neisseriagonorrhoeae;NspAGene;Clone/recombinantexpression;1mmunogenicity/identification淋病奈瑟菌感染引起的淋病发病率目丽居于我国各类性传播疾病首位［1］。淋病奈瑟菌感染后可产生特异性免疫力，但维持时间短导致重复感染。研究认为淋病奈瑟菌免疫逃逸机制可能与该菌外膜蛋H抗原多态性相关［2］。1999年Plante等研究发现淋病奈瑟菌表面蛋白A(NeisseriagonorrhoeaesurfaceproteinA,N

8、spA)氨基酸序列淋病奈瑟菌Z间同源性高达98%［3］。Plante等用放射性标记的NspA抗体检测NspA在细胞膜表而的暴露悄况表明淋球菌NspA位于完整的细菌表而［3］,可见NspA能在菌体表面持续表达，抗原高度保守并具有较强免疫原性，是一个很好的淋球菌疫苗候选者。本研究选择淋病奈瑟菌表面蛋白A作为研究对象.，通过克隆nspA棊因、重组表达