台湾线虫草发酵菌丝体的自由基清除活性成分研究

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1、分类号：Q939.9单位代码：10364密级：学号：11720388安徽农业大学学位论文台湾线虫草发酵菌丝体的自由基清除活性成分研究ComponentsstudiesonfreeradicalscavengingactivityoffermentationmyceliumfromOphiocordycepsformosana研究生：李扬眉指导教师：李春如教授合作指导教师：申请学位门类级别：理学硕士专业名称：微生物学研究方向：微生物与生物制药所在学院：生命科学学院答辩委员会主席：二零一四年六月万方数据独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

2、取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可以采用

3、影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学位论文作者签名：指导教师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通信地址：邮编：万方数据摘要本文对台湾线虫草OphiocordycepsformosanaKobayasi&Shimizu发酵菌丝体的自由基清除活性及成分进行了系统的研究分析，内容包括对台湾线虫草RCEF0868和RCEF5491菌株进行了液体发酵培养，得到发酵菌丝体的冻干粉；以DPPH、羟自由基和超氧自由基的清除活性为指标，选择自由基清除活性较优菌株并

4、对提取溶剂进行了优化选择；以优化选择的提取剂对较优菌株RCEF0868进行提取处理，得粗提物冻干粉并对其DPPH和羟自由基的清除活性进行定量分析；通过HPLC分离和活性测定的方式对主要活性成分进行了初步定位分析，并根据LC-MS的分析结果对活性成分的分子式和化学结构进行初步的分析和推断；根据自由基清除活性定量分析和活性成分的液质联用初步定性结果，进一步以DPPH自由基的清除活性为指标，对RCEF0868菌株有关活性物质进行了提取方法的优化。较优菌株和提取溶剂的选择结果表明：RCEF0868菌株的自由基清除活性相对较好，不同溶剂提取物对自由基的清除活性存在较大差异，

5、以水和甲醇两种提取物的活性较高。因此，本研究选定RCEF0868菌株为研究对象，对其水提取和甲醇提取物的DPPH和羟自由基清除活性进行进一步分析。RCEF0868菌株活性定量分析结果表明：随样品浓度的递增，其水提物和甲醇提取物对两种自由基的清除活性有所增强，当提取物浓度为5.0mg/ml时，反应20min后，水提取和甲醇提取物对DPPH的清除率分别达到87.83%和91.70%，其半抑制浓度IC50分别为0.85mg/ml和1.23mg/ml；对羟自由基的清除率分别达到90.04%和61.60%，其半抑制浓度IC50分别为1.37mg/ml和2.91mg/ml。综

6、上可知，RCEF0868菌株的水提取和甲醇提取物对DPPH均具有较好的清除活性，另外水提物对羟自由基的清除活性也较好，而甲醇提取物对羟自由基的清除活性相对较弱。活性组分的HPLC分离测定和LC-MS分析结果表明：水提取物中共检测出三个活性成分，其分子式分别为C6H14O6(1)、C14H17N5O8(2)和C20H33N5O9(3)；在甲醇提取物中检测出的活性成分除化合物1外，还包括C30H22O11(4)、C30H22O10(5)和C30H18O10(6)，以上六种成分均表现出DPPH自由基清除活性，其中化合物1、4和5同时还具有羟基自由基的清除活性。通过查询天

7、然产物数据库和参阅报道初步推断，化合物3可能为一种新化合物，其他化合物依次为D-Mannitol、Succinoadenosine、4a-Oxyrugulosin、Rugulosin和Skyrin，其中Succinoadenosine和4a-Oxyrugulosin为首次在虫生真菌中发现。提取优化中单因素试验结果表明：料液比(mg/ml)、温度(℃)和甲醇体积比率(%)I万方数据是影响DPPH自由基清除率相对主要的因素。进一步的三因素响应面优化结果表明：料液比(x1)和甲醇体积比率(x3)这两种因素对DPPH清除率(y)影响显著(P<0.05)，这两种因素之间不存

8、在明显影响