嗜肺军团菌多位点序列分型及脉冲场凝胶电泳的分析

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。．少旷∥。i’．一，，‘j广1飞：f：研究生签名：奔鼋’彩导师签章：I孙呻二级莩譬领导盖章：．∥。年月臼研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除

2、了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：．薪扩诱导师酶·小呻，DI＼年6只污Et目录⋯⋯111111i11l㈣洲11IIlIllIlIlIlI⋯ⅧY1901559中文摘要⋯⋯⋯OOD⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文嗜肺军团菌多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳分析引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第一部分嗜肺军团菌多位点序列分型前言⋯⋯⋯·⋯⋯⋯·⋯⋯

3、⋯⋯·····⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··9日U舌⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一”一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···6ODO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···1l附图OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOB⋯⋯⋯⋯⋯⋯OODOoOQQ⋯⋯⋯13附表⋯OOQO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“一⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”·24小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26第二部分嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳分析前言··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28月U舌“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一””“⋯⋯⋯“⋯“⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一28材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯I*01DOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28结果⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·32附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·33附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36讨论··⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯·⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯··38小结··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯

5、⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯40结{仑⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·····⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯·41附勇专⋯·······⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·42综述嗜肺军团菌分子分型研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谓}⋯···DODOo⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯··56个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57中文摘要嗜肺军团菌多位点序列分型及脉冲场凝胶电泳分析摘要目的：研究嗜肺军团菌菌株间

6、的分子特征，对不同地区来源的嗜肺军团菌进行分子分型研究，构建本地区SBT(sequence．basedtyping)数据库与DNA指纹图谱库，与国际SBT数据库比对，了解本地区与国内嗜肺军团菌分子进化情况及亲缘关系，为研究本茵的生物进化和种群结构的分析积累资料；于分析菌株之间的相关性，从而了解菌株的同源性，协助追踪感染来源，还有助于识别散发病例的传染源，可对已确认的暴发疫情进行传染源的追踪，从而有效预防疫情的再次发生。方法：1嗜肺军团菌SBT基因分型1．1DNA提取：将细菌加入到O．5ml灭菌水中，100。C煮沸8min，迅速冷却，10000

7、r／min离心3min后，取上清液作为初始PCR扩增的模板DNA。1．2引物合成及PCR反应条件的优化：合成7对引物，分别为嗜肺军团菌的7个等位基因flaA、pilE、asd、mip、mompS、proA、neuA。设置退火温度范围为50℃．60℃的12个温度梯度，优化退火温度。1：3将PCR产物纯化和测序：经毛细管电泳确定PCR扩增产物的纯度和浓度后，送上海生工进行产物纯化和测序。I．4测序结果校对和序列拼接及在线提交到EWGLI数据库：测序结果经Chromas软件校对、Clustall．81拼接后分析并上传到数据库(http：／／www．

8、hpa．bioinformatics．org．uk)进行比对，得到对应的等位基因号及ST型。1．5绘制种系进化树：将Clustall。81拼接后的7个等位基因的片段