一株降解有机磷农药细菌的分离与鉴定

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1、摘要农业产量的增加离不开农药的使用，其中有机磷农药因为具有使用便捷、效率较高和经济低廉等方面的优点，所以在20世纪70年代逐步取代有机氯农药，成为国内外在防治农业虫害方面最常用的农药。但随着有机磷农药的大量应用，由此带来的环境污染也给人们的健康带来严重威胁。因此，寻找利用可降解有机磷农药微生物对于环境保护具有重要意义。本文从山东省淄博市郊区的蔬菜大棚的土壤样品中分离出的一株能降解有机磷农药敌敌畏(二甲基二氯乙烯基磷酸酯)的细菌。根据对该菌进行了形态特征分析、生理生化特征分析以及16SrDNA序列同源性分析，将该菌鉴定为荧光假单胞菌，命名为荧光假单胞

2、菌P。测定了该菌的最适生长pH值和温度及其对敌敌畏的降解效率，结果显示，该菌的最适生长温度为27。C，最适生长pH值为7．0，荧光假单胞菌P能有效的降解敌敌畏，实验条件下4天内对敌敌畏的降解率为61．2％。同时，通过硫酸铵分级沉淀、DEAE—Sepharose4B离子交换层析和Superdex一75凝胶过滤层析从该菌纯化了有机磷水解酶。SDS．PAGE分析湿示该水解酶的分子量约为33．3kDa。该研究将为开发可降解敌敌畏的微生物制剂和恢复农药污染的土壤应用研究奠定了理论基础。关键词：敌敌畏，降解菌，荧光假单胞菌P，有机磷水解酶AbstractPes

3、ticidescontributemuchtotheincreaseofagriculturalproduction．Organophosphoruspesticideshavebeengraduallysubstituteorganochlorinepesticidessince1970sandbecomethemostcommonlyusedpesticidesinagriculralpestscontr01．HoweveLthewideutilizationofsuchpesticideshascausedseriousenvironment

4、alproblemswhicharethreatenpeople’Shealth．Therefore，tofindandapplicationofmirooranismsdegradingorganochlorinepesticideswillhaveimportanteffectsonenvironmentalconservation．Inthispaper,abacterialstraindegradingorganophosphoruspesticidedichlorvos(dimethyldichlorovinylphosphate，DDV

5、P)WasisolatedfromsoilsamplesinvegetablegreenhousesinasuburbofZiboShandongprovince．Thebacterialstrainwasidentifiedaccordingtoitsphysiologicalandbiochemicalchai'acteristicsand16SrDNAsequenceanalysis，andidentifiedasPseudomonasfluorescensstrainP．111eoptimalgrowthtemperature，pHvalu

6、eandDDVPdegradingefficiencyofthisstrainwereinvestigated，andresultsshowedthattheoptimaltemperatureWas27。C，theoptimumpHWas7．0，andtheDDVPdegradingefficiencyundertestconditionsWas61．2％in4days．Mealwhile．organicphosphatehydrolaseofP．fluorescensstrainPwaspurifiedbyammoniumsulfateprec

7、ipitation，ion—exchangechromatographyonDEAE—Sepharose4BcolumnfollowedbygelfiltrationchromatographyonSperdex一75column．SDS—PAGEanalysisindicatedtherelativemolecularweightoforganicphosphatehydrolaseofP．．fluorescensstrainPwas33．3kDa．Thisstudywilllayasolidfoundationforexploringmicro

8、bialagentsandrestoringsoilpollutedbyDDVP．Keywords：DDVP；Degrad