甲醛降解细菌的分离鉴定和降解效果测定

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1、甲醛降解细菌的分离鉴定和降解效果测定杨郁收稿日期：修订日期：基金项目：宁波市自然科学基金项目（2006A610072）作者简介：杨郁（1978～），女，硕士，讲师，主要研究方向为工业微生物应用，E-mail：yangyu@nit.net.cn金志华1李宁慧1金飞玲1黄翔和２(1浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院，宁波3151002浙江省诸暨市教育局，诸暨311800)摘要：从某化工厂污水处理系统的活性污泥中分离纯化得到一株能降解甲醛的革兰氏阳性菌，对其进行形态及生理生化特性测定，并提取并纯化其基因组DNA，通过PCR扩增菌株的16SrDNA，

2、测序结果表明该菌株和苏云金芽孢杆菌的同源性为100%。在含1.2μL/mL的甲醛的培养基上培养该菌36h后，甲醛降解去除率达到72％以上。关键词：甲醛；分离鉴定；16SrDNA；PCR中图分类号：文献标识码：文章编号：Isolation，IdentificationandDegradationeffectofaformaldehyde-degradingbacteriaYANGYu1,JINZhi-hua1,LINing-hui1,JINFei-ling1,HUANGXiang-he2(1BiotechnologyandChemicalEngin

3、eeringDepartmentofNingboInstituteofTechnologyZhejiangUniversity,Ningbo315100；2DepartmentofEducationofZhujiZhejiang)Abstract:AGrampositivebacteriastrainthatdegradesformaldehydewasisolatedfromactivatedsludgeofwastewatertreatmentplantfromachemicalcorporation..Thestrainwasobserve

4、dthroughstructureandphysiologicalandbiochemicalcharacteristics.MoleculeidentificationmethodsincludingdistilledDNA,PCRamplification,ProductionSequenceshowedthatitwassimilartoBacillusand16SrDNAsequenceshared100%homologywiththatofBacillusthuringiensis.Formaldehyde(1.2μL/mL)wasde

5、gradedabove72%with36hbythisstrain.Keywords:Formaldehyde；IsolationandIdentification；16SrDNA；PCR甲醛（HCHO）又名蚁醛，具有强烈的致癌和促癌作用。大量文献记载，甲醛对人体健康的影响主要表现在嗅觉异常、刺激、过敏、肺功能异常、肝功能异常和免疫功能异常等方面。被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质。目前，治理甲醛污染的方法主要有化学反应方法、物理吸附技术、臭氧负离子技术、纳米光催化技术、低温等离子技术、植物净化和生物降解等方法。但化学反应法大量反复使用会造成新

6、的二次污染；物理吸附法需要动力，能耗大；臭氧氧化法对无机物无效，有副产物，臭氧浓度太高时对人体有害；纳米光催化法效率较低、性能不稳定；低温等离子法耗电量大而且作用时间较短，需要不定期进行处理；植物净化法摆放过多，夜间使房内的二氧化碳浓度过高，影响健康。生物法降解甲醛具有降解效果好、投资费用低、占地面积小、工艺流程简单、无二次污染等优点而迅速成为国内外研究的热点。本文所研究的是从活性污泥中分离得到一株能降解甲醛的微生物，检定其作为降解甲醛应用菌的可能性，并对其进行生理生化特性鉴定及基因组的测序，确定其分类学位置，以期在工业生产中有所应用。1.材料与

7、方法1.1实验材料（1）试剂及试剂盒草酸铵结晶紫染液、卢氏碘液、番红复染液、孔雀绿染液、番红染液、1％结晶紫染液、20%硫酸铜水溶液、硝酸银鞭毛染色液、甲基红试剂、吲哚试剂、PCR产物纯化试剂盒（2）16SrDNA基因的扩增用试剂：10×buffer(includingMg2+)、dNTP、PCR引物（正向引物Pf:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′；反向引物Pr:5′-ACGGCTACCTTGTTACGACT-3′）、MgCl2、TaqPlusDNAPolymerase（3）培养基和溶液Ⅰ、LB培养基：胰化蛋白胨10g、NaC

8、l10g、酵母提取物50g、H2O1000mL、pH7.0Ⅱ、MS培养基：MgSO40.1gCaCl2.2H2O0.02gKH2PO40