rna干扰satb1基因对乳腺癌干细胞wnt信号通路的影响

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：豫峄签字日期：Ⅵ晴6月6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

2、印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：签字日期：、僧I≥午6月易日聊别币釜嚣签字日期；川I≥年侈月6臼’摘要舢IJlIFJI

3、JJllllJlllJJlll／llllJllJJlJl／JllJJJllJY2427140背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，复发和转移是导致乳腺癌治疗失败的主要原因。研究显示肿瘤中存在着少量肿瘤干细胞(cancerstemcells，CSC)，CSC是肿瘤发生、转移和复发的根源之一。CSC受一系列信号转导通路的调控，Wnt／p—catenin通路是其中的一种。SATB1(specialATrichsequencebindingprotein，SATBl)是一种组织特异性表达的核基质结合蛋白，S

4、ATBl通过调控Wnt／13．catenin通路影响肿瘤发生、浸润、转移及复发。目的：采用RNAi抑制乳腺癌干细胞SATBl表达，观察乳腺癌干细胞wnt．1、p．cateIlin的变化，研究SATBl对乳腺癌干细胞Wnt／p．catenin通路研究的影响。方法：1根据GenBank提供的SATBl基因序列，利用siRNA的合成原则，合成4组含干扰SATBl序列并包装至慢病毒载体。2为对照需要及摸索感染条件，将不含干扰序列的空包病毒转染MCF．7细胞得MCF．7／siControl作为阴性对照。34

5、组慢病毒载体分别转染MCF．7细胞，然后采用实时荧光定量PCR和Westernblot，检测4组MCF．7细胞SATBlmRNA和蛋白，筛选出SATBl基因抑制效果最好的MCF一7细胞(MCF一7／siSATBl)。4根据乳腺癌干细胞的特异性免疫标记CD44+CD24‘，通过流式细胞术分选出MCF．7干细胞、MCF．7／siControl干细胞和MCF．7／siSATB1干细胞。5实时荧光定量PCR检测上述三组乳腺癌干细胞writ．1、13-cateninmRNA表达。结果：1成功构建4组人SAT

6、Bl基因干扰的重组慢病毒：SATBl／GVll5．RNAi#1、SATBl／GVll5-RNAi#2、SATBl／GVll5-RNAi#3、SATBl／GVll5-RNAi#4，经包装产生的病毒滴度均大于1．0x108TU／ml。摘要2空包病毒载体及上述4组SATBl基因干扰的重组慢病毒分别转染MCF．7细胞，2—3天后GFP荧光表达均>70％，证实重组慢病毒转染MCF．7成功。MOI=20，添加完全ENi．S组的转染效率最高为94．85％。34种重组慢病毒感染的MCF．7细胞中，SATBl／GV

7、l15．RNAi#4组MCF．7细胞的SATBlmRNA相对表达量0．397+0．12，SATBl蛋白标化后的净光密度值为0．53324-0．027，与阴性对照组和空白对照组比较，经SPSSl7．0两个独立样本的t检验计算，差异具有统计学意义(P

8、胞仪检测MCF．7、MCF．7／siControl和MCF．7／siSATBI细胞标记CD44+CD24‘的表达。结果：@MCF．7：3．05％；@MCF．7／siControl：2．62％；@MCF．7／siSATBl：0．79％。然后采用流式细胞分选术成功分选MCF．7、MCF．7／siControl和MCF．7／siSATB1干细胞，并提取mRNA。5实时荧光定量PCR检测MCF．7干细胞、MCF．7／siControl干细胞和MCF．7／siSATBl干细胞的SATBl、w