p38mapk通路对il-1β刺激肺成纤维细胞表达icam-1的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。，。’．．?0。。研究生签名：密导师签雩彬二级学院领导尊章：?。-‘-．跏f≥年、爰月参》日j河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中

2、特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签瑚B年弓月踢日目录中文摘要⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文p38MAPK通路对IL-lJ3刺激肺成纤维细胞表达ICAM-l的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6刖舌”“““”⋯““⋯一“”““⋯”一“⋯⋯⋯一⋯””一“⋯⋯⋯”⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6

3、结果⋯⋯··⋯·⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15附图⋯0OIOQ⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨{念·····⋯⋯⋯··⋯·⋯··⋯··⋯·····⋯·⋯·····⋯⋯·⋯⋯⋯·⋯·⋯····20结j沦⋯⋯···⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯-····⋯····⋯···⋯⋯···⋯·⋯··⋯⋯⋯24参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24综述p38MAPK信号转导通路在肺脏疾病中的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯28致谢⋯·⋯⋯·⋯⋯·····⋯⋯··

4、·⋯·⋯⋯···⋯·⋯⋯··⋯⋯⋯⋯··⋯⋯·⋯·⋯45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46中文摘要p38MAPK路对IL．1B刺激肺成纤维细胞表达ICAM一1的影响摘要目的：肺内成纤维细胞增殖、细胞间粘附分子(intercellularadhesionmolecule．1，ICAM—1)表达是肺纤维化主要的发病机制，p38促丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径作为细胞内的主要信息传递系统之一，可以将细胞外的信息传递至细胞核中，可能参与肺纤维化的形成及发展过程。本研究在体外培养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，观察I

5、L．1p对肺成纤维细胞中表达ICAM．1的影响，测定磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)及其下游底物AP．1的表达水平，探讨p38MAPK通路在ICAM．1表达过程中的作用及可能涉及的细胞因子，深入研究肺纤维化的发病机制，并为其提供可能的治疗靶点。方法：Wistar胎鼠肺成纤维细胞培养：乙醚吸入麻醉临产Wistar孕鼠，取出胎鼠，开胸取出胎鼠肺组织，将支气管及结缔组织剔除，然后剪成l×1×lmm3大小的胎鼠肺组织块，放入含有胎牛血清(20％)的DMEM培养基，吹打均匀后涂于培养瓶。待细胞铺满瓶底后进行传代，在传代过程中去除红细胞、上皮细胞及

6、残余组织块等，使用结构、形态一致的第5～6代成纤维细胞进行实验。将培养的肺成纤维细胞分为三组(每组6复孔)，(1)对照组：应用只含有DMEM培养液的培养基，培养肺成纤维细胞6小时；(2)IL．16组：应用含IL．1D(15ng／m1)的DMEM培养基，培养肺成纤维细胞6小时；(3)SB203580+IL-113组：用p38MAPK抑制剂SB203580(IOOgM／L)预先处理成纤维细胞20分钟后，应用含IL．1B(15ng／m1)的DMEM培养基，培养肺成纤维细胞6小时。采用RT-PCR方法检测ICAM．1mRNA表达水平；采用Westernbl

7、otting法测定P．p38MAPK、AP．1／Jun蛋白的表达水平。结果：1成功培养Wistar胎鼠原代肺成纤维细胞：本实验采用组织培养技术培养Wistar胎鼠肺成纤维细胞，5～10h后显微镜下观察到组织块周围有圆形细胞游走出，1周左右，这种细胞逐渐变为椭圆或菱形，并呈放射状，足变长，相邻细胞间融合，互相连接，细胞核明亮，大且圆。经过2-3次胰中文摘要酶消化纯化，逐渐清除上皮细胞、红细胞及残留的组织块等，然后可见到较接近理想实验模型的肺成纤维细胞：形态一致，胞体丰满，胞质均匀，核仁清晰，生长良好，存在核分裂相。2RT-PCR技术检测ICAM．1m

8、RNA在肺成纤维细胞中表达水平的变化ICAM-lmRNA电泳条带的光密度扫描显示：在肺成纤维细胞中，对照组ICAM．1mR