谷胱甘肽转硫酶mu亚型在糖尿病肾病发病中的作用及干预治疗的实验的研究

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1、谷胱甘肽转硫酶Mu亚型在糖尿病肾病发病中的作用及干预治疗的实验的研究山东大学博士学位论文谷胱tt肽转硫酶Mu亚型在糖尿病肾病发病中的作用及干预治疗的实验研究姓名：江蓿中请学位级别：博士专业：内科学（肾脏病）指导教师:高海青20090921山东大学博士学位论文谷胱甘肽转硫酶亚型的表达在糖尿病肾病进展中的作用及干预治疗的实验研究研究生:江蓿导师:高海青专业：内科学中文摘要糖尿病肾病，是糖尿病患者最主要的微血管病变，发病率高，美国疾病控制中心资料显示,患者约占总人数的％以上。据美国、日本及许多西欧国家统计资料表明，已经上升为终末期肾脏病，的首位病因，在美国、口本的透析

2、患者屮，患者所占比例接近%。随着生活水平的提高和生活方式的变化，我国和发病率也成上升趋势。目前临床上早期诊断的主要依据是微量蛋白尿，而患者一旦出现微量蛋白尿，约有％的患者将不可避免地进展到明显蛋白尿进而发展至慢性肾功能衰退及。由于患者机体存在极其复杂的代谢紊乱，一旦发展至终末阶段，往往比其他肾脏疾病治疗更加棘手。而目前临床尚缺乏针对有效的特异性治疗。由于患者，尤其是型患者常伴有代谢综合征的其他表现，如高血压、高脂血症、中心性肥胖等，因此临床上针对的治疗以综合治疗为主，包括控制血糖、控制血压、降脂治疗及终末期替代治疗等，而治疗费用昂贵、疗效差和患者病死率高，一直是

3、糖尿病领域和肾脏病领域学者面临的问题。进一步探索的发病机希山以便制定更加有效的防治措施无疑是当今医学界急待解决的重大课题。发病机制十分复杂,包括了众多因素参与。总的来说，它是起始于糖代谢障碍所致的血糖过高，在一定遗传背景以及一些相关的获得性危险因子参与下,通过启动许多细胞因子网络，终于造成肾脏的损害。虽然有关的研究取得了很大的进展,但其发病机制尚未完全清楚。近年来,蛋白质组学技术在肾脏领域的研究逐渐增多，这对于深入了解肾脏的生理功能、揭示肾脏病的发病机理、发现新的诊断标志物以及识别新的治疗靶点有着深远的意义。而蛋口质组学技术山东大学博士学位论文也为深入研究发病机

4、制提供了全新的方法。本论文我们利用蛋白质组学技术对链服佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾组织蛋白质差异表达进行了研究,并进一步对其中的差异表达蛋白??谷胱廿肽转硫酶亚型在进展中的作用及干预治疗的意义进行了探讨。第一部分在诱导的大鼠肾脏表达的研究研究背景和目的随着人类基因组计划工作的完成,生物医注领域已经开始在基因水平对各种疾病进行深入的研究，但人们也逐渐认识到基因只是遗传信息的载体，而生理活动的执行者是基因的表达产物??蛋白质，要研究生命现象、阐明生命活动规律，需要对蛋口质进行全面的研究。只有对蛋口质数量、结构、性质、相互关系和生物功能全面认识,才能揭开生命现象的本质。因

5、此，蛋白质组学已成为“后基因组时期”牛物医学研究的重点内容之一。近年來，蛋口质组学技术在肾脏领域的研究也逐渐增多，这对于深入了解肾脏的生理功能、揭示肾脏病的发病机理、发现新的诊断标志物以及识别新的治疗靶点有着深远的意义。而蛋白质组学技术也为深入研究发病机制提供了全新的方法。论文第一部分我们利用蛋白质组学技术对诱导的糖尿病大鼠肾组织蛋白质差异表达进行了研究，以寻求糖尿病肾病可能的发病机制和治疗的新靶点。材料和方法健康雄性大鼠只，随机选取只作为正常对照组组，其余只用来建立糖尿病大鼠模型，作为糖尿病组组。正常对照组一次性尾静脉注射・％柠檬酸缓冲液，组一次性尾静脉注射•

6、％柠檬酸缓冲液/,天后取鼠尾血测定血糖，筛选模型成功的大鼠。以注射天后空腹血糖水平2./为糖尿病模型成功的标准。所有大鼠标准饲料喂养，自由饮水,持续观察周。于第周末处死犬鼠，取血测定空腹血糖、尿素氮、肌酉干、白蛋白、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、糖基化血红蛋白和晚期糖基化终末产物：山东大学博士学位论文留尿测定小时尿蛋白；取肾组织染色观察肾脏病理改变,应用双向凝胶电泳•和质谱鉴定方法比较犬鼠肾组织蛋白质的差异表达。结果•第周时组大鼠、、水平与组相比较均显著升高尸.；尿蛋口定量较组大鼠增多尸・。.光镜下染色显示，与组比较，组大鼠肾小球增多，系膜细胞增生，同时毛细血管部分

7、塌陷，肾小囊部分粘连。・双相电泳及质谱分析发现的大鼠肾组织的差异表达蛋白个，其中上调点个，下调点个,其生物功能包括物质代谢、氧化应激、信号传导、细胞增殖、细胞生长、细胞凋亡和热休克等。.个差异表达的蛋白中在组表达较组上调。检测发现组大鼠肾组织的表达也较组显著增高尸.,与蛋白质组学结果一致。结论•蛋口质组学技术是研究的发病机制和治疗的新靶点的有效方法;我们利用双相电泳及质谱分析发现的大鼠肾组织的差异表达蛋白个，其中上调点个，下调点个,其生物功能包括物质代谢、氧化应激、信号传导、细胞增殖、细胞生长、细胞凋亡和热休克等，这些差异表达的蛋白可能参与的发病。・对两组大鼠肾

8、组织的表达进行检测，发现