槲皮素对宫颈癌hela细胞放疗增敏及抑制转移的作用研究

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1、湖北中医药大学学位论文原创性声明本人声明：所呈交的学位论文是在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖北中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：加l叼年岁月谚日关于学位论文使用授权的声明伊训⋯⋯：槲，1锄鲐尸f彳W叫穆日目录中文摘要．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．⋯．I英文缩略词对照表

2、⋯⋯．⋯⋯⋯．．⋯．．．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．Ⅵ前言．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯⋯．．⋯．．．．．．⋯．．⋯．．．．⋯．．．．．．1胃U百．．．．．．．．．⋯．．．．．⋯⋯．．⋯．．．．．．⋯．．⋯．．．．⋯．．．．．．上正文⋯．．．．．．．．⋯⋯．．．．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．．5l材料⋯．．．．．．．⋯．．．．．．．．．⋯．⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯．⋯．．．．51．1实验细胞⋯⋯．．．．．．⋯⋯．．⋯⋯．⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯．51．2主要试剂．．⋯．．⋯．⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯．．51．3主要仪器．．．⋯．⋯．⋯⋯．．⋯⋯．

3、⋯．．．．⋯⋯．⋯⋯⋯51．4主要试剂配制．⋯⋯．．．．．．⋯．．．．⋯．⋯⋯．⋯．．⋯．．．．．．62方法⋯⋯．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．⋯⋯．．．．．⋯72．1HELA细胞的复苏与培养．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯．．．．⋯⋯82．2HELA细胞的照射条件．．．．．．．．．．．．．⋯．．⋯．．．．．．．．．．．⋯．．⋯82．3HELA细胞的计数．．．．．．．．⋯．．⋯⋯．⋯．⋯⋯．．．⋯．．⋯．．82．4MTT法检测槲皮素及射线对宫颈癌细胞的毒性及特点．．．．．．⋯．．．82．4．1槲皮素对HELA细胞增殖的抑制作用．⋯．⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．82．4．2槲皮

4、素对射线放射增敏作用．．．．．⋯．．．．⋯．⋯．．．．．⋯．．．．．92．5克隆形成实验观察槲皮素对Hela细胞的放射增敏作用．．⋯．．．．．．92．5．1先给药后照射时序下槲皮素的放射增敏作用．．．．．．．．．．．．⋯．．．92．5．2先照射后给药时序下槲皮素的放射增敏作用．．⋯．．．．．⋯．⋯102．6流式细胞法检测槲皮素对HELA细胞周期的影响．．．．．．⋯．．．．．．．．102．7细胞凋亡检测．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．112．7．1DAPI染色观察细胞凋亡．．⋯．⋯．．．．．．⋯．⋯．．．．．⋯．⋯112

5、．7．2流式细胞法检测各组细胞凋亡．．．．．．．．．．．．⋯．⋯．．⋯．．．．．112．8划痕实验观察迁移能力．．．⋯．．．．⋯．．．．．⋯．．⋯⋯．⋯⋯．122．9TRANSWELL细胞体外侵袭实验检测侵袭能力⋯．．⋯．．．．．．．．．．．．．122．10WESTERN’BLOT法检测BAX、BCL-2、VEGF、删P一9蛋白含量．⋯．⋯132．10．1蛋白的提取⋯⋯．．．．．．．．⋯．．．．．．⋯⋯⋯．．⋯．．⋯．132．10．2蛋白含量的检测⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．．．．．132．10．3BAX、BCL-2、VEGF、埘P一9蛋白含量的检测⋯．．．：．．．

6、．：．．．．．132．11统计学方法．．⋯．．⋯．．⋯．．．⋯．．．．．．⋯．．．．．．．．⋯．．．．143结果．．．．．j．．．．．．．．⋯．．．⋯．．．．⋯．．．．⋯⋯⋯．．⋯．．⋯．143．1MTT法检测槲皮素与射线对HELA细胞增殖的影响⋯．⋯⋯．．．．．143．2克隆形成实验观察槲皮素对宫颈癌细胞的放射增敏作用．⋯．．．：．153．3槲皮素及射线对HELA细胞周期的影响⋯⋯．．．．．．⋯．．．．．．．．．163．4细胞凋亡检测．．．．．．⋯．．⋯⋯．⋯⋯．．．．．．．⋯．．．．．．．⋯163．4．1槲皮素及射线作用于HELA细胞凋亡的形态变化．⋯．．．．⋯．．

7、．．163．4．2流式细胞法检测细胞凋亡率．．．⋯．．．．⋯⋯⋯．⋯⋯．．．．．173．5射线及槲皮素对HELA细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．173．6WESTERNBLOT法检测BAX、BCL-2、VEGF、埘P一9蛋白含量．．．．．．．．．193．6．1BAX与BCL-2蛋白含量的变化．．．⋯．．．．．．⋯⋯．．．．．⋯⋯．193．6．2VEGF与MMP一9蛋白含量的变化⋯．．．．⋯⋯⋯．⋯．．．．．．．．19讨论⋯⋯⋯．．．．．．．⋯．．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．⋯．．．．⋯．．．2l结{吾．．．．．⋯．．．．．⋯．．．．．．．．．