缺血预处理对大鼠肾缺血-再灌注损伤保护作用中自噬及凋亡相关蛋白的表达及其意义

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2、定。非涉密论文口论文作者签名：毖盛垃El导师签名：_J耻日期：罂!霉二j二i9苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明t所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的n．枣外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：．鑫亟王竺El期：丛止上k．，缺血预处理对大鼠肾缺血．再灌注损伤保护作用

3、中自噬及凋亡相关蛋白的表达及其意义中文摘要缺血预处理对大鼠肾缺血．再灌注损伤保护作用中自噬及凋亡相关蛋白的表达及其意义中文摘要目的：本实验探讨了缺血预处理对肾缺血．再灌注损伤的保护作用，通过与单纯缺血．再灌注相比较，从生化、细胞组织和蛋白水平阐明缺血预处理抗大鼠肾脏缺血．再灌注损伤的作用，为抗肾脏缺血一再灌注损伤提供新的策略和实验依据。方法：选用36只SPF级Sprague．Dawley雄性大鼠(SD大鼠，250．3009)，随机分为3组。假手术组(Shamoperatedcontrol，Sham组

4、，n=12)：大鼠常规麻醉后行开腹手术，立即切除右肾用作正常肾脏标本，游离左侧肾蒂血管，不夹闭，观察73min关闭腹部；缺血．再灌注组(IschemiaReperfusion，I／R组，n=12)：切除右肾，左肾蒂血管分离，观察28min后用无损伤动脉夹持续夹闭左肾蒂血管45min后，恢复左肾血流，关闭腹部；缺血预处理组(IsehemicPreconditioning，IPC组，n=12)：立即切除右肾，左肾蒂血管分离，行4个循环夹闭左肾蒂血管2miIl／再灌注5min预处理后，无损伤动脉持续夹闭4

5、5min，恢复左肾血流，关闭腹部。各组于再灌注后4h、6h、24h三个相应时间点采血和收获肾脏标本。本研究分为两个部分：1．缺血预处理抗大鼠肾缺血．再灌注损伤作用应用全自动生化分析仪测定血清肌酐(Serumcreatinine，SCR)、尿素氮(BloodUreaNitrogen，BUN)评价肾脏功能；Hematoxylinandeosin染色(HE染色)观察。肾组织病理形态学改变，评价缺血预处理抗大鼠肾脏缺血．再灌伤作用。2．缺血预处理抗大鼠肾缺血．再灌注损伤的相关蛋白研究2．1从抗细胞凋亡途径研

6、究缺血预处理抗大鼠肾脏缺血一再灌注损伤作用应用末端脱氧核苦酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TdT-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL法1检测大鼠肾组织细胞凋亡发生情况；采用免疫印迹(westernblot)法分别测定凋亡相关蛋白Bcl．2及Bax的表达情况，透射电镜观察肾脏组织凋T中文摘要缺血预处理对大鼠肾缺血-再灌注损伤保护作用中自噬及凋亡相关蛋白的表达及其意义亡现象。2．2从自噬相关途径研究缺血预处理抗大鼠肾缺血．再灌注损伤作用采用westernblot法测定

7、自噬相关蛋白Beclin．1的表达情况，透射电镜观察肾脏组织自噬现象。结果：1．缺血预处理抗大鼠肾缺血．再灌注损伤作用①肾功能的评价：sham组BUN水平在假缺血再灌注后4h，6h，24h=个时间点分别为7．72土0．66mmol／L、9．73+1．23mmol／L、9．68+1．50mmol／L，SCR水平为61．13+10．339mol／L、61．38土9．149mol／L、87．48土16．509mol／L；IPC组BUN水平在缺血再灌注后4h，6h，24h三个时间点分别为9．80士0．75m

8、mol／L、14．13士2．30mmol／L、20．37+4．23mmol／L，SCR水平为86．88士16．949mol／L、92．55+25．41gmol／L、171．83+33．229mol／L；I／R组BUN水平在缺血再灌注后4h，6h，24h=个时间点分别为10．47士0．79mmol／L、18．34士2．28mmol／L、33．4216．41mmol／L，SCR水平为94．35116．349mol／L、127．43士15．289mol／L、261．88士3