tsp-1在激素性股骨头坏死中的作用机制

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1、MechanismofTSP·1inThighBone’SNecrosisADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineBy彳三eiGuoSupervisor：Prof．XiaoWangProf．YanZhangLiMay,2014关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，

2、除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人(学位论文作者)签名：2014年5．A(oB关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众

3、检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)签名：2014学位论文指导教师签名：2014年SijI《o日摘要目的：股骨头坏死(osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH)是骨科常见病，创伤性ONFH主要见于髋部创伤，而非创伤性oNFH最常见于过量激素和饮酒口1。目前激素性股骨头坏死己居非创伤性股骨头坏死的首位乜，3

4、。激素性股骨头坏死(Steroid-inducedavascularn

5、ecrosisoffemoralhead，SANFH)的临床治疗进展缓慢，关节致残率极高，严重影响患者的生活质量。因其发病机制还不清楚，迄今尚缺乏有效的防治方法。内毒素可诱导血管的炎性反应且能造成血管内皮损伤，使血液呈血栓前高凝状态，在此基础上应用大量的激素来诱导股骨头发生坏死，此过程与临床上SANFH的发病过程相似¨1。血小板反应蛋白一1(Thrombospondin一1，TSP一1)是第一个被发现的内源性多肽类血管新生抑制剂，TSP-1通过抑制促血管生长因子与其在内皮细胞表面的受体结合而间接抑制血管新生。那么TSP—l在激素性股骨头坏死中的作用机制如何?TSP一1基因敲除后对激素性股骨头坏

6、死的影响还不清楚。本课题拟采用内毒素(LPS)联合激素诱导小鼠股骨头坏死。用TSP-1基因敲除型(TSP-1KO)小鼠和野生型小鼠为模型，比较TSP-1KO小鼠股骨头坏死的情况。通过此实验来探讨：1．TSP一1基因在激素性股骨头坏死中的表达。2．TSP一1基因对激素性股骨头坏死的影响。3．TSP—l基因对肿瘤坏死因子(TFN-a)、白介素l(IL一1B)表达的影响。方法：取6周龄C57BL／6小鼠20只，随机分为A、B组(n=10)。A组是空白对照组，B组是LPS联合激素(甲泼尼龙琥珀酸钠，甲强龙)组，C组是TSP一1KO组(n=6)。B、C组小鼠每只按50ug／kg剂量腹腔注射内毒素(LPS

7、)，每天1次，连续2天。第3天按20mg／kg剂量开始腹腔注射甲强龙，每天1次，连续3天。A组于同时间点腹腔注射等量生理盐水。于第1次注射LPS后3周时处死A、B组小鼠各4只，观察模型是否成功建立。取股骨头和肝脏组织苏木精一伊红染色(hematoxylin—eosinstainingHE)、免疫组织化学染色(immunohistochemistry，IHC)进行观察。取肝脏组织提取mRNA进行PCR，检测TSP-1基因的表达。6周时处死A、B、C组全部小鼠，取股骨头和肝脏组织HE染色、免疫组织化学染色进行观察，取三组小鼠肝脏组织提取mRNA进行PCR，检测TNF—Q、IL-1B的表达。采用SP

8、SSl7．0软件对实验结果进行分析。数据用平均数±标准差表示，组间数据比较用单因素方差分析，PO．05为无显著差异，无统计学意义。结果：3周时A、B组小鼠HE染色观察：A组肝脏正常，肝脏组织结构清晰；股骨头骨小梁完整，排列规则，骨细胞清晰可见，髓间脂肪细胞相对较少，形态正常。B组肝细胞肿胀，细胞内可见小脂肪空泡，肝索