i,ks通道辅助亚基kcne1c-末端缺失突变体的功能分析

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1、东南大学硕士学位论文I<,Ks>通道辅助亚基KCNE1C-末端缺失突变体的功能分析姓名：李小青申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：谢维;沈之君20090618中文摘要IKs通道辅助亚基KCNE1C-末端缺失突变体的功能分析研究生：李小青导师：谢维教授沈之君教授东南大学“发育与疾病相关基因"教育部重点实验室，离子通道与疾病研究中心东南大学基础医学院，南京210009摘要：KCNEl，为电压依赖性钾离子通道KCNEl／KCNQl(亦称Il(s通道)的调节亚基，该通道介导心肌细胞动作电位中的复极

2、化IKs电流。而KCNEl对于该通道独特的慢激活特征的维持是不可替代的。据文献报道KCNEl的胞内片段(C．端)在调控II(s通道动力学特征上起主要作用，但具体的部位并不十分清楚。另据文献报道kcnel基因的突变可致临床上具有很高致死率的心率不齐疾病心脏长QT综合征的五型(LQT5)。近年来有研究发现多态性位点(singlenucleotidepolymorphism，SNP)也具有潜在的致病性，但与LQTS的关系尚不十分明确。基因库的资料表明，人源kcnel存在一个SNP位点318C／A(氨基酸

3、：106C忍er)，318A造成终止密码子提前出现，导致KCNEl胞内C．末端24个氨基酸的缺失(末端缺失片段称C24，末端缺失C24的突变体称ⅪcNEl-△24)。通过基因同源性比对进一步发现，C24在不同种系的KCNEl间有很高的同源性，但在不同种系KCNE家族成员(KQ呃1．5)间的同源性却很低，提示C24片段与KCNEl的独特功能有关。因此，本文拟通过建立突变体KCNEl-A24，研究该突变体与KCNQl之间的相互作用，分析该突变体的功能。利用分子克隆和点突变技术构建了野生型的KCNEl和

4、突变体KCNEl-A24，并在HEK293及CHO细胞系中进行瞬时表达。蛋白免疫印迹、细胞免疫染色和免疫共沉淀的结果表明，该突变体在细胞系中的表达、亚细胞定位与野生型KCNEl无明显差异，说明C24片段缺失不影响其表达、亚细胞定位及与KCNQl的装配。全细胞膜片钳记录数据表明，该突变体与野生型KCNQl所形成的通道呈现电压依赖性曲线右移及通道激活速率变慢，而通道的电流密度无显著性变化。本文的数据提示，末端缺失C24片段的突变体KCNEl-A24可与野生型KCNQl形成功能性通道；该突变通道在生物物

5、理学特征上明显不同于野生型的通道，表现为通道的开放时程交慢及开放所需的激活电压变正。由此我们推测，SNP位点318C／A导致的C24片段缺失的KCNEI突变体可能会因延长心肌细胞复极化过程而致QoT间期延长。目前尚未见该突变体所致KCNEI／KCNQl通道功能异常及临床上相关LQT5病例的报道。我们将在原代培养的心肌细胞中，对该突变体的潜在致病性作进一步中文摘要的研究。关键词：Ilcs通道；KCNEl；LQTS：C-末端；C24；KCNEl-A24Ⅱ英文摘要FunctionAnalysisbout

6、theCteinusnalysSab0UtC-termTruncat"一⋯CNE1inIKsncationFormofKCN1IChannelGRADUATESTUDENT：LIXiaoqingSUPERVISOR：Prof．XIEWei，Prof．SHENZhijunKeyLaboratoryofDevelopmentalgenesandHummandisease，MinistryofIonChannelsandDiseaseSchoolofBasicMedicalScience，Southea

7、stUniversity,Nanjing210009AbstractAbstract：KCNElisanaccessorysubunitoftheslowlyactivating，voltage-dependentKCNEl／KCNQl(Igs)channelmediatingtherepolarizingc吼．铋tsIKsincardiacmyocytes．K(NElplaysallimportantroleinmaintainingthecharacteristicsofthechannelv

8、iaitsinteractions、)l，iththeKCNQlsubunits，althoughexactsitesandmechanismsforthisinteractionarcnotfullyunderstood．MutationsofkcnelhasbeenreportedcausinglongQTsyndrome(LQT5)inclinical．RecentstudieshaveimplicatedthatsomeformsofSNP(singlenucleotide