盐酸关附甲素对心肌钠通道及辅助亚基调控机制研究.pdf

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3—1上^—．L日Ⅱ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5第一部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7实验过程及方法⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．13讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17第二部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22材料与方法．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯22实验过程及方法⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯23统计分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26结果⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．26结论及讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29附表．．．⋯．⋯⋯⋯．．⋯．．．⋯．．．⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯．．32第三部分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．35实验过程及方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41结论与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯45．1．附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．50参考文献⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62综述⋯．．⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．67致

3、谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯78盐酸关附甲素对心肌钠通道及辅助亚基调控机制研究摘要第一部分乳鼠心肌细胞原代培养目的：为第二部分及第三部分药物干预实验提供合格心肌细胞。方法：以出生24zJ',时以内乳鼠作为实验材料，酶分离法于无菌条件下消化分离出单个心肌细胞，使用差速贴壁法分离纯化心肌细胞。用含10％胎牛血清的DMEM／F12培养液，于C02浓度为5％的37。C恒温培养箱中培养心肌细胞。每24小时换二分之一体积培养液，当细胞搏动频率大于100次／分后，可进行第二部分实验。结果：成功培养出可自主搏动的心肌细胞25次，且细胞搏动频率均达100次／分以上。结论·i乳鼠出生时间越

4、短，其心肌细胞活性越强。严格无菌操作是细胞培养的基础；分离消化过程中减少组织细胞损伤是细胞存活的前提；培养过程中保持细胞所处环境稳定，是提高原代培养心肌细胞质量的保障。关键词：细胞培养：原代细胞分离；乳鼠心肌细胞原代培养第二部分：盐酸关附甲素及胺碘酮对乳鼠离体心肌细胞干预目的：探讨盐酸关附甲素(GuanfubaseA，GFA)及胺碘酮(Amiodar,Amio)孵育离体培养的心肌细胞后，其自主搏动节律的变化情况。方法：以第一部分实验所得的心肌细胞，为本部分实验材料。使用不同浓度的GFA及Amio孵育细胞，分别在孵育3小时、6小时、12d',时、24tJ',后观察，计数心肌细胞搏动频

5、率。观察不同干预条件，心肌自主搏动频率变化。每个时间点观察完毕后，收集细胞，于．80℃保存，作为第三部分实验材料。结果：．1．GFA及Amio对心肌细胞自主搏动均有抑制作用。GFA抑制作用与孵育时间及药物浓度呈正相关，Amio抑制作用与孵育时间相关性更强。当孵育时间达到一定长度后，两种药物对心肌细胞自主搏动频率的抑制差异不再具有统计学差异。结论：GFA及Amio均可抑制离体心肌细胞自主搏动，且两者抑制效果不具有统计学差异。关键词：盐酸关附甲素：胺碘酮：可达龙：心肌细胞搏动频率第三部分：盐酸关附甲素及胺碘酮对心肌细胞钠通道及其辅助亚基表达的影响目的：检测两种药物对心肌细胞钠通道及其辅

6、助亚基表达的影响。方法：提取每组标本．营,mRNA，使用逆转录(I玎)及聚合酶链式反应(PCR)，选择GAPDH为内参，检测钠通道SCN5A，SCNlB，SCN3B，SCN4B基因的表达情况。结果：GFA和Amio可抑制通道基I因SCNlB，SCN3B表达(PO．05)。GFA对SCNlB，SCN3B，SCN5A的抑制作用还表现出时间依赖性(P

7、SCN5A，SCNlB，SCN3B，SCN4BRegulationmechanismofGFAoncardiacsodiumchannelandauxiliary．subunitsSUUnItSAbstractPartIPrimarycultureofratsmyocardialcellObjective：Toprovidequalifiedcardiacmyocytesfordruginterventionexperiment．Methods：Useratsasex