131i标记抗nrp-1单克隆抗体在荷胶质瘤裸鼠体内分布和spectct显像研究

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4、神经鞭毛素受体．1(neuropilin-1，NRP-1)，是Scmaphodn3A和血管内皮生长因子(VEGF)的共受体，参与肿瘤血管新生，肿瘤生长和转移。它在多种肿瘤组织中高表达，并与肿瘤的恶性程度密切相关，被认为是一个很有前景的肿瘤显像与治疗靶点。但目前针对NRP．1靶点分子显像，尚缺乏有效的特异性探针，为了发展靶向NRP．1的靶向显像药物，我们实验室前期通过杂交瘤技术制备了一株靶向NRP．1的功能性单克隆抗体一A6，本课题拟采用碘131标记的抗神经鞭毛素抗体(131I-A6-MAb)做为分子探针

5、，探讨131I．A6．MAb体外特性、在荷瘤裸鼠中的生物学分布特征及其靶向显像特性。实验方法(1)我们通过用rProteinA亲和柱纯化将抗NRP．1抗体从小鼠腹水中纯化，并且通过SDS．PAGE鉴定抗体的纯度，ELISA方法鉴定抗体的亲和力。(2)采用Iodogcn法标记碘131和抗神经鞭毛素(Neuropilin-1NRP—1)单克隆抗体，制备131I-A6．MAb探针，凝胶柱分离法纯化131I．A6．MAb探针，放射性纸层析法(TLC)鉴定131I-A6．MAb放化纯度，Elisa法鉴定”1I．A

6、6．MAb免疫活性，体外观测法鉴定”1I．A6．MAb稳定性。(3)选用U87胶质瘤细胞株，采用细胞摄取实验测定探针结合特异性，饱和结合实验测定探针结合力，细胞内吞实验测定探针内吞速率。(4)建立人胶质瘤U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为4组，每组4只，通过尾静脉注射131I．A6．MAb7．4MBp与未标记抗体(0、2．5mg／kg，5mg／kg、10mg／kg)，并于注射后24、48、72、96和120h处死小鼠。取血、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、骨骼、肌肉、甲状腺及肿瘤组织，测质量及放射性计数

7、，经时间衰减校正后计算每克组织的放射性摄取率(％ID／g)。(5)将荷U87MG胶质瘤模型裸鼠随机分2组，一组为未阻断组，另一组为阻断组，每组4只，经尾静脉注射7．4MBql31I．A6MAb(即未阻断组)或与700gg未标记抗体同时注射(即阻断组)，于注射后不同时间点(12、24、48、72、96、120h)行SPECT／CT显像。实验结果(1)SDS．PAGE检测显示经纯化的抗NRP．1抗体A6的纯度为95％，浓度为4mg／mL：ELISA检测抗体的亲和力为原腹水结合力的76％。(2)纸层析法结果计

8、算表明，131I．A6．MAb标记率为98％，放化纯为98％；96h稳定性测试表明，131I-A6．MAb在室温下存放以及在PBS溶液中，其标记率仍然都维持在85％以上，说明其具有良好的体外稳定性。(3)细胞实验显示，131I．A6．MAb可特异性结合U87MG细胞表面NRP．1抗原，并在1h时达到高峰为15．80±1．30％；其与细胞表面抗原亲和力∞)为1．67±O．14rim，与抗原结合后的细胞内吞速率为25．7±3．O％(8”，表明了