tac3tacr3在黑线仓鼠繁殖过程中的调控作用

《tac3tacr3在黑线仓鼠繁殖过程中的调控作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、索取号：Q341密级：公开硕士学位论文Tac3/Tacr3在黑线仓鼠繁殖过程中的调控作用研究生：王婷指导教师：薛慧良教授徐来祥教授培养单位：生命科学学院一级学科：生物学二级学科：遗传学完成时间：2016年3月10日万方数据硕士学位论文生物学王婷曲阜师范大学万方数据曲阜师范大学研究生学位论文原创性说明（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）本人郑重声明：此处所提交的博士□/硕士□论文《Tac3/Tacr3在黑线仓鼠繁殖过程中的调控作用》，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间独

2、立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分外不包含他人已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究工作做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签名：日期：曲阜师范大学研究生学位论文使用授权书（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）《Tac3/Tacr3在黑线仓鼠繁殖过程中的调控作用》系本人在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□/硕士□学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内容不得以其他单位的名义发表。本

3、人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他复制手段保存论文，可以公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期：万方数据摘要摘要动物的繁殖活动是由众多因子通过错综复杂的神经内分泌系统调节下丘脑-垂体-性腺轴活动的一个极其复杂的过程。动物为了获得最大的繁殖成功率，只在特定的季节进行繁殖活动，这种现象称为季节性繁殖。季节繁殖是影响动物种群数量波动的主要原因之一，Tac

4、3/Tacr3在调节动物季节性繁殖活动中发挥着重要作用。Tac3编码神经激肽B(NKB），NKB是一种含有特定的十个氨基酸的多肽；Tacr3编码NK3R，NK3R是NKB的天然受体，属于视紫红质七次跨膜G蛋白偶联受体家族。黑线仓鼠（Cricetulusbarabensis）是典型的季节性繁殖动物，具有春、秋两个繁殖高峰期，是研究动物季节性繁殖机制的理想模型。本研究以黑线仓鼠为材料，采用分子生物学方法和技术，检测Tac3/Tacr3在黑线仓鼠的不同组织、不同发育阶段及不同季节的差异表达，揭示Tac3/

5、Tacr3系统参与动物季节性繁殖活动的调控机理，旨在从分子水平上探究黑线仓鼠种群数量的季节性爆发机制。首先，以黑线仓鼠下丘脑为材料，采用普通PCR扩增的方法得到黑线仓鼠Tac3cDNA序列396bp（GenBank登录号：KU519331），包括完整的编码区序列360bp；获得Tacr3cDNA序列1256bp（GenBank登录号：KU519332），包括编码区序列1244bp。对其进行生物信息学分析，建构系统发育树。Tac3编码119个氨基酸残基，前21个为信号肽区域，C末端含有一个高度保守的结

6、构功能域，即特征性十肽-Asp-Met-His-Asp-Phe-Phe-Val-Gly-Leu-Met，是速激肽家族的典型特征。速激肽保守的羧基末端，是速激肽作用于受体的基本结构，这种进化过程中的高度保守性说明这一类肽在生命活动中有着不可替代的重要作用。Tacr3编码区长1244bp，编码414个氨基酸残基，对二级结构进行分析表明整体疏水性较强。SMART对所得氨基酸序列进行相关结构分析，发现该序列存在7个明显的高疏水区域，而这七个高疏水区组成七个完整的α螺旋结构域，属于典型的G蛋白偶联受体家族视紫

7、红质亚家族。使用MEGA5.0软件对黑线仓鼠的Tac3/Tacr3核苷酸序列与中国仓鼠、金黄仓鼠、牛、人等多个物种的相应核苷酸序列进行比对，构建了系统发育树，所得结果与传统物种分类结果相一致。其次，采用实时荧光定量PCR技术检测Tac3和Tacr3在黑线仓鼠不同组织器官、不同发育阶段、不同季节中的相对表达量，采用酶联免疫反应检测了不同发育阶段、不同季节黑线仓鼠血清中NKB/NK3R（Tac3/Tacr3表达蛋白）的浓度，探究该系统对繁殖活动的调控模式。通过检测Tac3和Tacr3在组织器官间的差异表

8、达，发现Tac3和Tacr3在黑I万方数据摘要线仓鼠下丘脑中表达量远远高于在肝、肾、脾等其他器官组织中的表达量（P<0.01），而且血清中蛋白含量在不同发育阶段差异并不显著（P>0.05），表明Tac3/Tacr3系统主要在中枢神经系统中发挥调控作用，下丘脑是Tac3/Tacr3系统作用的关键部位。通过检测Tac3和Tacr3在不同发育阶段的差异表达，发现Tac3和Tacr3在雌性黑线仓鼠幼体时期表达量最高（P<0.05），在雄性黑线仓鼠亚成体时期表达量最高（P<0.