黑线仓鼠esr与季节性繁殖的关联性探究

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1、分类号：Q344+.13学校单位代码：10446硕士学位论文论文题目：黑线仓鼠ESR与季节性繁殖的关联性探究研究生姓名：林佩佩学科、专业：生物化学与分子生物学研究方向：动物分子生物学导师姓名、职称：薛慧良副教授徐来祥教授论文完成时间：2014年4月万方数据曲阜师范大学博士/硕士学位论文原创性说明（在□划“√”）本人郑重声明：此处所提交的博士□硕士□论文《黑线仓鼠ESR与季节性繁殖的关联性探究》，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读博士□硕士□学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分外不包含他人已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究工作做出重要贡献的个人和集体，均已在

2、文中已明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签名：日期：曲阜师范大学博士/硕士学位论文使用授权书（在□划“√”）《黑线仓鼠ESR与季节性繁殖的关联性探究》系本人在曲阜师范大学攻读博士□硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□硕士□学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他复制手段保存论文，可以公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期：万

3、方数据曲阜师范大学生命科学学院2011级硕士毕业论文摘要黑线仓鼠（Cricetulusbarabensis）是我国北方农田的优势害鼠之一，以其分布广，繁殖力强，种群数量大，给人们的农业生产和日常生活带来严重危害。受温度、光照、食物等多种因素的影响，黑线仓鼠的繁殖行为存在季节性，每年的春季和秋季是其种群数量增长的高峰期。雌激素是主要的性激素，通过与其受体的结合调控动物的繁殖，但具体调控的分子机制尚不清楚。雌激素受体（Etrogenreceptor，ESR）是核受体超家族的一员，分为两个亚型ESRα和ESRβ。ESRs不仅参与动物下丘脑-垂体-性腺轴的繁殖活动调控，而且参与和繁殖密切相

4、关的脂肪代谢、血糖代谢、摄食等能量代谢及机体的应激反应。本研究通过检测黑线仓鼠体内ESRα和ESRβ在不同季节、不同器官中的差异表达，为研究ESRα和ESRβ的生物功能及其分子调控机制奠定基础，为研究黑线仓鼠的季节性繁殖调控机制提供科学依据，为鼠害的防治提供理论依据。首先，用RT-PCR方法克隆黑线仓鼠ESRα和ESRβ的cDNA序列，研究得到黑线仓鼠ESRα序列1017bp，全部为编码区，Genbank登陆号：KC345615；ESRβ的cDNA序列896bp，全部为编码区，Genbank登录号：KF267446。运用生物软件分别对二者的序列结构分析，发现ESRα存在14个磷酸化

5、位点，ESRβ存在13个磷酸化位点，在二者的A/B功能区磷酸化位点存在差异，ESRα具有4个连续的丝氨酸磷酸化位点，而ESRβ则不具有这一结构，推测这跟两种受体在机体内的生理功能不同有关。二级结构预测发现ESRα和ESRβ都含有较多的α螺旋和Turn转角Coil卷曲螺旋，都具有较强的亲水性。构建ESRα和ESRβ的分子系统进化树结果显示二者都是与同是啮齿类的大鼠、小鼠最先聚为一类,其次是与灵长类的人和狒狒以及偶蹄目的绵羊、牛和野猪聚为一类，最后与原鸡和三文鱼聚类，二者的分子系统进化树结果与传统的分类结果相一致，显示ESRα和ESRβ功能的重要性和进化的相对保守性。其次，本研究采用实

6、时荧光定量方法检测ESRα和ESRβ在黑线仓鼠不同组织的表达差异。结果显示：ESRα在子宫、卵巢、肾上腺、下丘脑、附睾的相对表达量高，ESRβ在卵巢、子宫、下丘脑、大脑、睾丸中相对表达量较高，二者在脾脏中的相对表达量都较低。对两种雌激素受体在同一组织的相对表达量分析发现，在雌性黑线仓鼠体内ESRα在下丘脑、肾上腺和子宫的相对表达量极显著高于ESRβ（P<0.01），ESRβ只在卵巢的表达量高于ESRα，二者差异不显著。在雄性黑线仓鼠体内，对比两种受体在同一组织的相对表达量，ESRβ在睾丸中的表达量显著高于ESRα(P<0.05)；在附睾、肾上腺、肾脏中ESRα的表达量高于ESRβ，

7、在肾脏中二者的相对表达量存在极显著差异(P<0.01)；在下丘脑和大脑中，二者的差异不显著。最后，用实时荧光定量PCR的方法检测ESRα和ESRβ在不同季节黑线仓鼠体内不同I万方数据曲阜师范大学生命科学学院2011级硕士毕业论文组织的差异表达。结果显示：在雌性下丘脑中，ESRα的表达量有冬季>夏季>春季>秋季，冬季表达量与其他三个季节存在极显著差异（P<0.01）；ESRβ的表达量有冬季>夏季>秋季>春季，冬季表达量与春季和秋季的表达量有极显著差异(P<0.01)；不