黑线仓鼠rfrp-3克隆及其对繁殖的调控机制研究

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1、分类号：Q341学校单位代码：10446硕士学位论文论文题目：黑线仓鼠RFRP-3克隆及其对繁殖的调控机制研究研究生姓名：赵磊学科专业：动物学研究方向：动物分子生物学导师姓名职称：徐来祥教授徐金会副教授论文完成时间：2014年4月万方数据曲阜师范大学研究生学位论文原创性说明（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）本人郑重声明：此处所提交的博士□/硕士□论文《黑线仓鼠RFRP-3克隆及其对繁殖的调控机制研究》，是本人在导师指导下，在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间独立进行研究工作所取得的成果。论文中除注明部分外不包含他人已经发表或

2、撰写的研究成果。对本文的研究工作做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式注明。本声明的法律结果将完全由本人承担。作者签名：日期：曲阜师范大学研究生学位论文使用授权书（根据学位论文类型相应地在“□”划“√”）《黑线仓鼠RFRP-3克隆及其对繁殖的调控机制研究》系本人在曲阜师范大学攻读博士□/硕士□学位期间，在导师指导下完成的博士□/硕士□学位论文。本论文的研究成果归曲阜师范大学所有，本论文的研究内容不得以其他单位的名义发表。本人完全了解曲阜师范大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门送交论文的复印件和电子版本，允

3、许论文被查阅和借阅。本人授权曲阜师范大学，可以采用影印或其他复制手段保存论文，可以公开发表论文的全部或部分内容。作者签名：日期：导师签名：日期：万方数据曲阜师范大学生命科学学院2011级硕士毕业论文摘要我国农田鼠害问题严重，给农业生产造成了极大困扰；并且害鼠能传播疾病，对人类生存也是一个严重威胁。因此鼠害治理工作的开展显得尤为必要，其成功防治将具有重要且深远的意义。黑线仓鼠（Cricetulusbarabensis）是我国农田的主要鼠种，繁殖力强且危害严重，并具有季节性暴发的特点。本研究旨在通过检测黑线仓鼠繁殖候选基因RFRP-3在中枢

4、组织及外周组织的表达模式，期望揭示黑线仓鼠繁殖的内在分子调控机制，为进一步深入阐明黑线仓鼠种群动态年际波动机理提供理论依据。研究选取黑线仓鼠为实验材料，采用RT-PCR技术克隆了繁殖相关基因RFRPcDNA序列；利用实时荧光定量PCR技术检测了RFRPmRNA在黑线仓鼠成体不同组织的表达情况；并在此基础上对两个重要的通路节点基因RFRP和GnRH在不同发育时期、不同发情时期及不同季节繁殖轴组织中的表达水平进行了研究，获得如下结果：1、克隆获得黑线仓鼠RFRP基因cDNA共643bp，包括570bp的ORF，共编码SPAPANKVPHSA

5、ANLPLRF-NH2（黑线仓鼠RFRP-1）和TLSRVPSLPQRF-NH2（黑线仓鼠RFRP-3）两种RF酰胺相关肽（RFRPs）序列。RFRP基因序列生物信息学分析显示，RFRP是一种跨膜蛋白，且其结构在进化过程中相对保守，预示了RFRP具有保守且重要的生物学功能。2、RFRPmRNA在黑线仓鼠表达较为广泛，下丘脑、子宫、卵巢、睾丸组织中均有RFRPmRNA表达，提示RFRP-3功能的多样性，且RFRPmRNA在下丘脑的表达量极显著高于其他组织（P＜0.05），提示RFRP-3的作用可能主要通过脑内机制实现。3、黑线仓鼠不同发育

6、时期、不同发情时期RFRPmRNA的表达量存在显著差异，呈现出以中枢组织（下丘脑）表达为主、外周组织（卵巢、子宫、睾丸）表达为辅的特点。与雌性老体相比，雌性成体下丘脑中RFRPmRNA的表达量显著降低（P＜0.05）；与雄性亚成体和老体相比，雄性成体下丘脑中RFRPmRNA的表达量显著增加（P＜0.05）。结果表明RFRPmRNA在雌性黑线仓鼠的表达与RFRP-3抑制生殖的功能相一致，RFRPmRNA在雄性个体的表达与RFRP-3抑制生殖的功能不完全一致。同时RFRPmRNA在雌性成体发情期的表达量显著低于成体其他发情时期（P＜0.05

7、），这一结果也进一步表明了RFRP-3可能抑制雌性黑线仓鼠的生殖。4、四季黑线仓鼠下丘脑中RFRPmRNA的表达量显著高于外周性腺组织（P＜0.05）。与春季、秋季和冬季的雌性个体相比，夏季雌性个体下丘脑中RFRPmRNA的表达量显著增加（P＜0.05）；与春季、夏季和秋季的雄性个体相比，冬季雄性个体下丘脑中RFRPmRNA的表达量显著增加（P＜0.05）。结果提示在不同季节RFRPmRNA的表达可能受到光周期的影响，并且光周期对RFRP-3的调控机制可能存在性别差异。同时，研究发现血清中I万方数据曲阜师范大学生命科学学院2011级硕士

8、毕业论文MT与RFRP-3浓度的变化表现出了一致性，表明RFRP-3的合成分泌可能依赖于体内光信号MT的释放，并且RFRP-3可能受到MT的直接调节。雌性夏季下丘脑中RFRPmRNA的表达量高于秋季（P＜0