hpv l1在宫颈癌caski和hela细胞中的表达研究

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1、分类号R71密级公开UDC硕士学位论文HPVL1在宫颈癌CaSki和HeLa细胞中的表达研究学位申请人：付冰冰学科专业：妇产科学指导教师：肖长义教授二○一三年三月三峡大学硕士学位论文ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineStudyonthetheExpressionofHPVMajorCapsidProteinL1inCaSkiandHeLaCellsGraduateStudent:FuBingbingMajor:Gynaecologyand

2、ObstetricsSupervisor:Prof.XiaoChangyiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMarch,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大

3、学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：Ⅰ三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：本课题应用HPVL1的通用型引物对培养的宫颈癌细胞CaSki、HeLa的mRNA进行扩增，以明确其是否有L1的表达；应用两种针

4、对HPVL1蛋白的抗体进行免疫学检测，从基因和蛋白水平研究HPVL1在两种细胞中的存在情况，了解其与宫颈癌的发生有无相关性，为将L1作为宫颈癌及其它HPV所致肿瘤的免疫检测和免疫治疗的靶标物质的可能提供实验依据。同时比较本课题组制备的兔多抗血清与小鼠抗HPVL1单克隆抗体（可检测HPV1、6、11、16、18、31）在检测HPV16、18、31型时是否有相同的检测能力。方法：（1）培养CaSki、HeLa及HaCaT细胞，提取细胞mRNA及细胞总蛋白。（2）实时定量PCR检测宫颈癌细胞CaSki、HeLa是否有HPVL1mRNA的表达。（3）应用HPVL1兔多抗血清及小鼠抗HPV

5、L1单克隆抗体（可检测HPV1、6、11、16、18、31）通过免疫印迹实验（WesternBlot）方法和免疫组织化学法对宫颈癌细胞CaSki、HeLa中L1蛋白表达情况进行检测。以昆虫细胞－杆状病毒表达系统表达的重组HPV31L1蛋白作对照。并比较本课题组制备的兔多抗血清与小鼠抗HPVL1单克隆抗体（可检测HPV1、6、11、16、18、31）在检测HPV16、18、31型时是否有相同的检测能力。结果：（1）成功培养了CaSki、HeLa及HaCaT细胞并提取处于对数生长期的细胞mRNA及细胞总蛋白。（2）实时定量PCR通过HPVL1的通用引物MY09/11、GP5+/6+引

6、物对CaSki、HeLa细胞的mRNA进行扩增结果均为阳性。（3）免疫印迹实验（WesternBlot）方法检测结果显示HPV31L1重组蛋白在55KD处出现条带，CaSki、HeLa细胞在80KD处出现条带；免疫组织化学法检测CaSki、HeLa细胞内细胞浆及细胞质均出现阳性反应。（4）HPVL1兔多抗血清和小鼠抗HPVL1单克隆抗体均在检测HPV16、18、31型时均为阳性。结论：在mRNA水平和蛋白水平证实了HPV16阳性的CaSki细胞和HPV18阳性的HeLa细胞内有HPVL1的表达。有望将L1作为宫颈癌及其它HPV所致肿瘤的免疫检测和免疫治疗的靶标物质的可能。证实了本

7、课题组制备HPVL1兔多抗血清具有检测HPV16、18、31的能力，并且与小鼠抗HPVL1单克隆抗体的检测能力相当。关键词：人乳头瘤病毒宫颈癌L1蛋白表达Ⅱ三峡大学硕士学位论文AbstractObjectiveTodetecttheexpressionofHPVmajorcapsidproteinL1inHPVpositiveuterinecervixcancercells,usingimmunofluorescencetechniqueoftwoantibodiesforthe