22q11微缺失在先天性心脏病中的检测及相关性研究

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1、南昌大学硕士学位论文22q11微缺失在先天性心脏病中的检测及相关性研究姓名：丁琰申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：段君凯201206摘要目的：采用荧光原位杂交(，FISH)及多重PCR技术对先天性心脏病患儿进行22qll微缺失检测，探讨22q11微缺失与先天性心脏病的发病及表型之问的关系；比较FISH法和多重PCR技术的优缺点。方法：选取200例散发先天性心脏病患儿作为实验组和120例健康儿童作为对照组，留取全血，分别进行以下实验：1．标本进行预处理，制成浓度合适的细胞悬液，分装于2个EP管中并分别标

2、记A组、B组：2．A组标本：采用TUPLEl／ARSADNA探针，结合FISH技术，检测其22q11微缺失情况；3．B组标本：选择覆盖经典缺失区域(typicaldeletionregion，TDR)的4个短串联重复序列多态位点(STR)：22D41、22D42、22D43、D22S873，采用盲法，应用多重PCR技术对标本进行扩增，通过毛细管电泳观察峰值，检测22q11微缺失情况。结果：1．FISH检测结果显示：在200例先天性心脏病患儿中共检出22q11微缺失7例，检出率为3．5％。其中，在85例室间隔

3、缺损患儿中检测到22q11微缺失3例，缺失率为3．5％；32例法洛氏四联症患儿中检测到22q11微缺失2例，缺失率为6．3％；26例室间隔缺损合并房间隔缺损患儿中检测到22q11微缺失2例，缺失率为7．6％。而其余先天性心脏病患儿及正常对照组儿童均未检测出22qll微缺失。2．多重PCR检测结果显示：在200例先天性心脏病忠儿中共检出22q11微缺失8例，其中7例和FISH检测结果一致，有l例室间隔缺损患儿STR标记分析22q11微缺失结果为阳性，而该例患儿FISH检测结果为阴性。摘要3．以FISH法为金标

4、准，对多重PCR方法进行如下评价：灵敏度为100％；特异度为99．48％；假阳性率约为0．52％；Kappa为0．929。4．22q11微缺失与先天性心脏病关系：在实验组中，22q11微缺失率为3．5％(7／200)；对照组中，22qll微缺失率为O％(0／120)。经Fisher精确概率法检验，P=0．048(≤0．05)，差异有统计学意义。5．22qll微缺失与先天性心脏病表型的关系：(1)根据已检测出22qll微缺失阳性结果将实验组分为法洛氏四联症组、室间隔缺损组、室间隔缺损合并房间隔缺损组，并进行统

5、计学分析。经Fisher精确概率法检验，P值为O．636(p>O．05)，无显著性差异：(2)将实验组中复合畸形患儿分为法洛氏四联症组(包括法洛氏四联症伴多发畸形)及其他复合畸形两组，并进行统计学分析。经Fisher精确概率法检验，P值为0．608(p>0．05)，无显著性差异；(3)将实验组分为圆锥动脉干畸形组、非圆锥动脉干畸形组进行比较，经Fisher精确概率法检验，P值为0．311(p>O．05)，差异无统计学意义。结论：1．22qll微缺失与先天性心脏病发病相关。2．22ql1微缺失与非综合征型先天

6、性心脏病表型可能无关。3．基于STR的多重PCR检测方法可用于先天性心脏病患儿22qll微缺失的筛查。关键词：22qll微缺失；先天性心脏病；多重PCR；FISH；STRAbstractobjective：ABSTRACTThisexperimentadoptedfluorescenceinsituhybridization(FISH)andmultiplePCRmethodstodeterminetherelationshipofChromosome22q1microdeletionandCongenti

7、alHeartdiseaseandcomparetheadvantagesanddisadvantagesofthesetwomethods．一Methods：WeSelected200childrenwithcongenitalheartdiseaseasthecasegroupand120healthychildrenascontrolgroup．Taketheirperipheralbloodsamplesanddothefollowingexperiment：1．Extractedthecellsf

8、romtheperipheralbloodandmadetheappropriateconcen．trationofliquid．PackedthemintwoEPtubesandlabeledgroupA，groupB；2．GroupAsamples：weadoptedTUPLEl／ARSADNAprobeandcombinedwithfluorescenceinsituhybridization(FISH)t