利用基因芯片对疏叶骆驼刺幼根耐盐差异表达基因的研究

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1、新疆农业大学硕士学位论文利用基因芯片对疏叶骆驼刺幼根耐盐差异表达基因的研究姓名：赵洁申请学位级别：硕士专业：草业科学指导教师：张博;王涛20090601利用基因芯片对疏叶骆驼刺幼根耐盐差异表达基因的初步研究摘要以新疆耐盐豆科植物疏叶骆驼刺C4thagisparsifotia)为研究对象，对其种子萌发耐盐性进行了研究；利用Affymetrix公司的截型苜蓿基因组芯片(MedicagoGenomeArray)，包括61278个探针，检测疏叶骆驼刺幼根在220mmol／LNaCl胁迫处理0h和24h的差异表达基因，利用GO功能注释对所获得的差异表达基因进行分析，结合PCR技术设计引物对探针所对应的

2、功能基因在疏叶骆驼刺中进行克隆；建立了疏叶骆驼刺的茎段离体快繁体系，为苗期耐盐性测定奠定基础。主要研究结果如下：1．疏叶骆驼刺种子在300mmol／LNaCI浓度以下发芽率为100％，700mmol／LNaCI浓度仍能萌发，发芽率为40％；在400．700mmol／L盐胁迫下，其发芽率随着盐浓度的升高呈下降趋势，根长与盐浓度呈负相关。2．在61278个探针中，Oh检测到5133个，24h检测到5378个。差异表达基因246个，其中上调的有147个，下调的有119个。3．通过GO分析了部分上、下调差异表达基因，差异表达基因主要参与能量代谢、信号传导、物质运输、细胞壁合成。4．利用PCR技术克隆

3、出疏叶骆驼刺FDH基因，其编码区总长为840bp(36．875)，编码280个氨基酸序列。其编码序列和蛋白质序列与豆科植物百脉根(Lotuscorniculatus)相应序列的同源性分别为91％和90％。5．疏叶骆驼刺茎段快繁体系：MS+0．5mg／L6-BA加．1mg／LNAA+I．5g／LLH，增殖倍数为6．8；LH能促进苗的生长，增加芽分化能力，GA3对骆驼刺茎段离体培养无显著促进作用。关键词：疏叶骆驼刺；基因芯片：NaCI胁迫；差异表达基因；基因克隆UsingtheMicroarrayTechnologytoStudyonDifferentialExpressionGeneofAlh

4、agisparsifoliaRootunderSalinityStressAbstractInthisresearch，weserveXinjianghalophyteleguminousplantsAlhagisparsifoliaasplantmaterial．TheeffectofdifferentconcentrationNaCIonthegerminationofAlhagisparsifoliaseedwasstudied．InordertounderstanddifferentialexpressiongeneinAlhagisparsifoliaroot，theresearc

5、hwasstudiedbyMedicagoGenomeArray(61278probes)ofAffymetriccompany．Theroothadbeenexposedto220mmol／LNaCIforOhand24h．ByGOannotationanalyzingthesedifferentialexpressiongenes．DesignedtheprimercombiningPCRtechnologytoclonethefunctiongeneoftheprobeinA／hagisparsifoliaTheinvitropropagationofA／ha#sparsifoliab

6、ycuttingsWasestablishedasthebaseofseedlingsalttolerancevalidated．ncresultsasfollow：1．TheA／hagisparsifoliaseedgerminationrateWas10CI％whentheNaCIsolutionbelow300mmol／L．Itstillgerminatedin700mmoi／Landtheseedgerminationratewas40％．Betweenthe400-700mmo!／L,theseedgerminationrateWasdeclineastheNaClconcentr

7、ationincreasing．TherootlengthwasnegativetotheNaCIconcentration．2．Inthe61278probes，5133geneswerescreenedinOhrootand5378geneswerescreenedin24h．Therewere246differentialexpressiongenes，theup—regulatedgenewas147