2-吡咯酮衍生物hl-5201的合成及药理活性研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文2．吡咯酮衍生物HL．5201的合成及药理活性研究Synthesisandpharmacologicalstudyofthe2-pyrrolidonederivativeHL．5201课题来源：广东省自然科学基金($2011010003789)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院黄利雷林生教授药理学学术型硕士研究生药学院2013年4月1日广州硕士学位论文lIIIIIIIIIIY24065472-1]1七咯酮衍生物HL-5201的合成及药理活性研究硕士研究生：黄利指导教师：雷林生教授摘要目的：通过“一锅煮”多组分反应(MC黜)合

2、成2．吡咯烷酮类衍生物HL．5201，并探讨HL一5201的抗炎免疫等相关药理活性。方法：1)以丁炔二酸二乙酯、环己胺、2．氨基吡啶和甲醛为原料，冰醋酸为催化剂，在乙醇溶剂中，采用“一锅煮”四组分反应合成2．吡咯烷酮类衍生物HL．5201，采用薄层色谱法(TLC)监测反应的进行，通过硅胶柱层析或重结晶法对粗产物进行分离纯化。通过质谱(MS)、核磁共振氢谱(1H-NMR)和碳谱(13C-NMR)分析确认HL．5201的结构。通过改变不同组分的摩尔比、反应溶剂种类、投料方法和反应温度等条件，对反应条件进行优化。2)常规制备小鼠腹腔巨噬细胞，建立LPS(10vg／m1)刺激小鼠腹

3、腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)、白细胞介素．113(IL．1B)、白细胞介素．6(IL．6)和肿瘤坏死因子(TNF．0c)等炎症因子实验模型。采用格里斯试剂(Griess)检测HL．5201对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响；通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测HL．5201对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL．113、IL．6和TNF．o【的影响。评价HL．5201体外抗炎活性。采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀，建立小鼠急性炎症模型，观察ItL．5201对小鼠耳廓肿胀度的影响，T摘要评价HL．5201的体内抗炎活性。31采用醋酸诱导小鼠扭体反应和热板致痛实验模型，观察H

4、L-5201的镇痛活性。4)常规制备小鼠腹腔巨噬细胞和小鼠脾细胞，采用MTT法检测HL一5201对正常小鼠腹腔巨噬细胞和脾细胞的代谢活力的影响；并通过P13K、P38MAPK、JAK-2等信号通路阻断剂、蛋白酶体或基因转录抑制剂，研究HL-5201影响小鼠腹腔巨噬细胞代谢活力的可能作用机理。采用中性红法检测HL-5201对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。常规制备小鼠脾细胞，利用脂多糖(LPS，10og／m1)或刀豆蛋白(ConA，4oe,／m1)分别诱导小鼠脾细胞增殖，采用MTT法观察HL．5201对小鼠脾细胞增殖反应的影响。5)通过小鼠尾静脉注射印度墨汁，建立小鼠碳粒廓清

5、实验模型，观察HL一5201对小鼠非特异性免疫功能的影响。以兔红细胞为抗原，豚鼠血清制作补体，建立小鼠体液免疫反应模型，检测I--IL．5201对小鼠血清溶血素水平的影响，评价HL．5201对小鼠体液免疫功能的影响。以二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠迟发型超敏反应，并分离其脾脏和胸腺，观察HL．5201对小鼠耳廓肿胀度、脾脏指数和胸腺指数的影响，评价HL．5201对细胞免疫功能的影响。61采用MTT法检测HL．5201对S180肿瘤细胞体外增殖的影响。抽取$180腹水，接种于小鼠前肢腋下，建立S180荷瘤小鼠动物模型，观察HL-5201对$180荷瘤小鼠肿瘤的影响。结果：11

6、合成反应在3h内完成，目标产物(HL．5201)以白色结晶或固体从溶剂中析出，采用硅胶柱层析法(流动相：正己烷：乙酸乙酯=6～1：1)或重结晶法可对产物进行分离纯化。产物经MS、1H-NMR和13C．NMR确证结构(化学名：N．(2．吡啶基)．4．环己氨基．5．氧代．2，5．二氢．3．吡咯甲酸乙酯)。通过对反应条件的优化，得到最佳反应条件(各组分摩尔比：丁炔二酸二乙酯：环己胺：2．氨基吡啶：甲醛：冰醋酸=1：1：1：3：2；溶剂：无水乙醇：投料方式：丁炔二酸二乙酯与环己胺在乙醇中预先反应10min，再加入2一氨基吡啶、甲醛与冰H硕士学位论文醋酸的混合液；反应温度：室温)。在

7、该反应条件下，产率可达81．2％。2)LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌炎症因子(NO、IL．1B、IL．6、TNF．a)实验中，与空白对照组相比，LPS(10pg／m1／能显著刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO、IL．1B、IL．6和TNF．a(P=0．000、P=0．000、P=0．000、P=0．000)；与LPS组相比，HL．5201能有效抑制LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞产生NO，浓度为60gmoI／L时的抑制效果最佳(尸-0．000)，抑制率达到52．5％，与地塞米松(1gmol／L)相当。HL．5201能明显抑制L